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为实现肉毒毒素A重链C-端结合区(BoNT/AHc-C)在原核表达系统中高效表达,对编码基因序列重新优化设计,以16条长片段寡核苷酸引物经重叠PCR合成BoNT/AHc-C基因片段,插入表达载体pET-His,再转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS中进行诱导表达,重组蛋白约占细胞总蛋白的65％,以金属螯合亲和层析法纯化重组蛋白,然后对其进行了稀释复性,获得纯度大于95％的可溶性重组蛋白,Western印迹和间接ELISA均证明,该重组蛋白与抗天然BoNT/A马血清抗毒素有特异性结合反应。用纯化的rBoNT/A-Hc-C免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤Sp2/O细胞融合,经间接ELISA筛选和克隆化制备杂交瘤细胞系,获得3株杂交瘤细胞株,命名为2A8、4F7和2F2,可稳定分泌单克隆抗体,IgG亚类鉴定均为IgG1,2A8可保护小鼠抵抗10LD_(50)BoNT/A的攻击,以蛋白G亲和层析纯化腹水抗体,获得纯度大于95％的抗体蛋白。为获得核糖体展示所必需的全部组件,采用重叠PCR技术合成pT7PD质粒,它可以有效的进行体外转录和体外翻译。