荷叶黄酮提取、分离纯化及其抗氧化活性的研究

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荷叶属睡莲科植物莲的叶片,是国家卫生部公布的既是食品又是药品的植物。荷叶中富含多种具有生物活性的成分,如荷叶精油、荷叶生物碱、荷叶多糖及荷叶黄酮等,其中荷叶黄酮是其主要活性物质。报道显示黄酮具有多种生物学活性,如抗氧化、降血糖、降血脂以及增强免疫等活性,本论文通过对荷叶黄酮提取、分离纯化、结构鉴别、抗氧化及抑菌活性研究,尝试筛选出一种具有潜在医药价值的天然抗氧化及抑菌的黄酮组分,本研究的主要结果如下:1.荷叶黄酮的提取及其条件优化采用水提法从荷叶中提取粗黄酮,采用响应面Box-Behnken实验设计方法对荷叶黄酮提取时间、液固比以及提取温度进行优化从而获得最佳的黄酮提取工艺,采用多元回归分析对实验数据进行拟合对并其进行统计学方差分析,得最佳提取条件如下:提取时间96min,液固比30,提取温度64,在此优化条件下,粗黄酮得率为3.86%,与预测值3.74%非常接近。2.荷叶黄酮的分离纯化用半制备HPLC对经AB-8大孔树脂初步纯化后的荷叶黄酮进行分离分析,建立了荷叶黄酮高效分离及测定的最佳色谱分析条件:色谱柱为Waters C18反相柱(150mmx10mm I.D.,5μm),流动相A:乙腈(色谱纯),流动相B:超纯水(含0.1%甲酸),进样量为600μL,流速为3mL/min,柱温为30℃,检测波长为254nm,梯度洗脱条件为:0--20min,5%A95%B--40%A60%B。3.荷叶黄酮的结构鉴别通过紫外光谱并添加诊断试剂,液质联用等现代仪器方法对分离得到的黄酮组分进行结构鉴别。分析所得到的五种荷叶黄酮单体为槲皮素-3-O-桑布二糖苷、金丝桃苷、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸、异槲皮苷和槲皮素。4.荷叶黄酮的体外抗氧化活性采用fenton反应方法、邻苯三酚自氧化方法测定和评价三种荷叶黄酮单体(半制备液相分离纯化获得)的抗氧化效果。实验结果表明荷叶黄酮单体均具有良好的清除羟基自由基和超氧阴离子自由基的能力,其中槲皮素的抗氧化活性最强。5.量子化学计算分析荷叶黄酮抗氧化构效关系本研究采用Gaussian03程序,对三种荷叶黄酮分子作DFT-B3LYP/6-311G(d)几何全参数优化,对其分子构型、键解离焓、电子性质等方面进行了理论计算。从理论角度探讨黄酮分子的结构对其抗氧化活性的影响。理论计算表明荷叶黄酮分子中C-3位的糖苷取代基对其自身的抗氧化活性具有负面影响,糖苷数量越多,抗氧化活性越弱。6.荷叶黄酮的抑菌活性研究以食品中的常见污染菌为供试菌,以抑菌圈直径和半抑制率为活性检测指标,对荷叶黄酮各组分抑菌特性进行了系统地研究。荷叶黄酮各组分中,槲皮素的抑菌活性最高,对供试菌中细菌的抑制效果最好,对革兰氏阳性菌的抑制效果优于革兰氏阴性菌。对各供试菌的抑制效果依次为:金黄色葡萄球菌>枯草芽抱杆菌>大肠杆菌。
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