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目的:研究青楷槭中的化学成分并进行质量分析,探讨青楷槭化学成分的抗弓形虫作用。基于网络药理学的研究方法,探讨青楷槭治疗弓形虫病的作用机制,明确青楷槭化学成分通过多靶点、多途径产生抗弓形虫的多种信号通路。运用分子对接的方法,结合网络药理学,对分离出的青楷槭化合物与关键作用蛋白进行对接,筛选具有潜在抗弓形虫作用的天然化合物。方法:1.青楷槭干燥茎皮部分采用90%乙醇回流提取,提取物减压蒸馏得到乙醇提取物浸膏。采用溶剂梯度萃取法,利用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯依次进行萃取,减压蒸馏得到三种萃取物浸膏。采用多种色谱分离技术手段对得到的不同极性的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯浸膏进行分离和纯化。通过单体化合物的核磁共振光谱(1H-NMR和13C-NMR)及其理化性质进行结构鉴定。2.对青楷槭中分离得到的化学成分红景天苷、酪醇,通过高效液相色谱法(HPLC)测定含量(Venusil ASB C18色谱柱:5μm,4.6×250 mm,流动相:15%甲醇-水,流速:1 m L·min-1,色谱柱中的温度:40℃)。3.通过四唑盐(MTT)比色法,检测青楷槭中分离得到的单体化合物的抗弓形虫作用,通过人胃上皮细胞(GES-1细胞)和感染刚地弓形虫后GES-1细胞的IC50值,计算出选择性指数(SI),评估青楷槭单体化合物的抗弓形虫作用。4.基于网络药理学对青楷槭活性成分与弓形虫靶点进行预测。利用分子对接对青楷槭活性成分与热休克蛋白70(TgHSP70)靶点进行结合,确定抗弓形虫病活性较好且对接效果较好的活性成分。结果:1.在该实验中,从青楷槭的乙酸乙酯提取层中获得了18种化合物,并通过光谱分析鉴定为酪醇(1),红景天苷(2),β-D-吡喃半乳糖苷(3),二氢松柏醇(4),(对羟基苯基)乙酸甲酯(5),4-羟基苯甲酸(6),没食子酸(7),没食子酸乙酯(8),4-羟基苯基乙酸(9),2-(4-羟基苯基)乙基3,4,5-三羟基苯甲酸酯(10),6-羟基-7-甲氧基香豆素(11),氟西汀(12),松香碱(13),东莨菪亭(14),(+)-没食子儿茶素(15),槲皮素(16),1,4-苯二甲酸(17),邻苯二甲酸二乙基己酯(18)。分离出的化合物有10个苯酚类化合物,4个香豆素类化合物,2个黄酮类化合物,2个苯甲酸脂类。化合物3、4、5、6、8、9、10、11、12、13、17、18是首次从该植物中分离出来的化合物。化合物3、4、5、17、18是首次从该科中分离出来的化合物。2.通过含量测定青楷槭乙醇提取物中红景天苷和酪醇的含量为3.1227 mg/g、1.0900 mg/g。青楷槭水提取物中红景天苷和酪醇的含量为2.14744 mg/g、0.5458mg/g。3.在体外实验(MTT)中,化合物6’-O-半乳糖苷,槲皮素,苦瓜甙A,二氢松柏醇,(-)-没食子儿茶素-3-O-没食子酸酯,6-羟基-7-甲氧基香豆素值比spi大,表明这些化合物在GES-1细胞中的细胞毒性较小。九种被测化合物的IC50(μM)均高于spi值,表明该化合物对弓形虫的毒性更大。其中,槲皮素,苦瓜甙A和6-羟基-7-甲氧基香豆素的SI优于spi,表明这些化合物可能比螺旋霉素具有更好的抗弓形虫活性。4.通过网络药理学和分子对接,筛选得到青楷槭19个活性成分,涉及446个作用靶点;分子对接显示主要活性成分与核心靶点具有较好的结合活性。富集到GO生物过程(biological process)1504条、分子功能(molecular function)58条、细胞组分(cellular component)31条;KEGG通路124条,包括TNF、IL-6等信号通路。通过将青楷槭分离得到的18种化合物与目标蛋白TgHSP70进行分子对接,筛选出具有更好活性的化合物。其中,更好的活性和更好的对接效果的结果是(+)-gallocatechin(-5.778)>asculetine(-5.682)>salidroside(-5.562)>2-(4-hydroxyphenyl)ethyl 3,4,5-trihydroxybenzoate(-5.392)>gallic acid(-5.310)。评价了通过分子对接方法获得的5种单体化合物(+)-没食子儿茶素,松香碱,红景天苷,2-(4-羟基苯基)乙基3,4,5-三羟基苯甲酸酯和没食子酸的抗弓形虫活性,并评估了评价该单体与TgHSP70蛋白结合的能力。结论:本研究从青楷槭的乙醇粗提物的乙酸乙酯层分离得到18个单体化合物,为进一步研究青楷槭作用机理及开发利用该药用植物资源提供了基础。通过体外实验证明了青楷槭提取物具有抗弓形虫活性。用网络药理学和分子对接方法探讨青楷槭治疗弓形虫病的作用机制,本研究初步揭示了青楷槭可能通过多个成分,多个靶点,多条信号通路协同发挥治疗弓形虫的保护作用,为其深入研究提供了基础。本研究增加了我们对青楷槭化学成分的了解,为青楷槭的开发与应用提供了可靠的理论依据。