1背景及目的胆囊癌发病率居消化道恶性肿瘤第5位,是最常见的胆道恶性肿瘤,高发年龄为50~70岁,女性患者约为男性患者的2~3倍。慢性胆囊炎和胆囊结石为胆囊癌的危险因素。胆囊癌早期症状隐匿,疾病进展快,恶性程度高,早期诊断较为困难,部分病例是剖腹手术时偶然发现。当患者出现腹痛、黄疸等症状时,往往已处于癌症晚期,错失根治性切除手术的机会。局部放疗可以延长胆囊癌患者的中位生存时间,然而胆囊癌的远处转移发生概率较高,造成放疗效果大打折扣。目前尚无统一有效的胆囊癌的化疗方案,多以5-Fu、铂类、吉西他滨、卡培他滨、阿霉素等药物为主,其效果并没有得到可靠的研究证实。CD147是恶性肿瘤发生和发展过程中重要的关键分子,它可以诱导细胞外基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinases,MMPs)的产生,从而促进肿瘤的侵袭和转移;可以上调血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,促进肿瘤血管的生成;可以保提高瘤细胞锚着非依赖性生长的能力,拮抗肿瘤细胞的失巢凋亡;促进肿瘤细胞多耐药性的产生。MMPs为细胞外基质金属蛋白酶,MMP-9是MMPs家族成员之一,又称为明胶酶B,其可以降解细胞外基质和基底膜,从而促进肿瘤细胞的播散和转移,同时还可以促进肿瘤增殖、调节细胞外基质,调整各种生长因子以及促进血管形成等。相较于慢性胆囊炎、轻度不典型增生、胆囊腺瘤组织,胆囊癌组织高表达CD147和MMP-9,并且其表达与胆囊癌的分化程度、临床分期、淋巴结转移和患者中位生存时间呈正相关,因此CD147和MMP-9可能是胆囊癌治疗的一个潜在作用靶点。CD147拮抗肽9(Antagonist peptide,AP-9)是通过随机噬菌体肽库筛选出的可以特异性结合到CD147分子上的多肽,由12个氨基酸组成其可以与CD147特异性结合,并起到拮抗的作用,比如减少MMP-9的活性。多西环素(Doxycycline,DOX)属于第三代半合成四环素类广谱抗生素,其可以通过抑制金属蛋白酶、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖等方面途径达到抗肿瘤的作用。本研究通过观察CD147拮抗肽9及多西环素分别及联合用药对胆囊癌细胞系(GBC-SD)的增殖、凋亡、CD147表达和MMP-9活性的影响,为胆囊癌的药物治疗寻求新的方法。2资料和方法将AP-9(50、100、200、400μg/ml)、DOX(5、10、20、40μg/ml)和联合用药(AP-9 200μg/ml+DOX 20μg/ml)作用于胆囊癌细胞12、24、48h,CCK-8法检测细胞增殖,western blot法检测CD147表达,明胶酶谱法检测MMP-9活性,Annexin V/PI染色法流式细胞仪检测早期凋亡率,结果采用t检验。3结果不同浓度AP-9处理组的早期凋亡率(2.13±0.10)%,(2.92±0.19)%较对照组(1.58±0.08)%升高(p=0.002、p<0.001);MMP-9活性(320.08±33.90,249.59±33.63,259.63±34.08,172.31±35.20)较对照组(446.08±42.42)降低(p=0.013、0.002、0.003、0.001);增值抑制率较对照组升高(p均<0.01)且呈时间和剂量依赖趋势。不同浓度多西环素处理组的早期凋亡率率(3.25±0.12)%,(3.63±0.24)%较对照组(1.58±0.08)%明显升高(p均<0.001);MMP-9活性(203.52±18.25,175.22±23.30,147.86±22.83,109.99±29.22)较对照组(446.08±42.42)降低(p=0.001、p<0.001、p<0.001、p<0.001);增值抑制率较对照组升高(p均<0.01),CD147表达(0.97±0.12,0.80±0.10,0.69±0.11,0.51±0.12)较对照组明(2.04±0.15)显降低(p均<0.001)。联合用药后较单独用药,细胞增殖抑制率(38.78±0.39)%,(43.76±0.71)%,(52±0.91)%升高(p<0.05),MMP-9活性(110.19±24.74)降低(p<0.05),早期凋亡率(3.73±0.29)%升高(p<0.05)。4结论DOX可减少胆囊癌细胞CD147表达,AP-9和DOX单独或联合用药均可以抑制胆囊癌细胞增殖、抑制MMP-9活性,促进细胞凋亡,且联合用药后抑制作用增强。