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目的： 作为着丝粒重要组件，Zwint-1参与招募动力蛋白激酶和动力蛋白，促进染色体运动或调控纺锤体检查点，在着丝粒组装和有丝分裂中期适当沉默 SAC起到关键作用，以此确保染色体正确分离。通过进一步实验，来考察Cdc20与 Zwint-1之间的关系，以及 D-box序列在这其中发挥的作用，为进一步理解控制染色体分离的分子机制打下基础。 方法： 经PCR、双酶切鉴定等一系列实验技术来构建重组质粒pCMV-myc-Cdc20、pcDNA3-flag-Zwint-1、pcDNA3-flag-Zwint-1ΔD-box、pEGFP-Zwint-1和 pEGFP-Zwint-1ΔD-box；采用胸腺嘧啶双阻断法将HEK293T细胞同步化在 G1/S期，用流式细胞术通过碘化丙啶染色来确定细胞时相，用Western blot检测Zwint-1蛋白在细胞周期的表达水平；使用放线菌酮和MG132处理细胞，经Western blot检测来观察Zwint-1蛋白在体内的降解情况；对HEK293T细胞转染了质粒 pCMV-myc-Cdc20，即过表达 hCdc20，做了Cdc20与 Zwint-1之间的免疫沉淀实验；过表达 hCdc20和 RNA干扰 Cdc20，用Western blot来检测内源性Zwint-1蛋白质水平；将分别编码Zwint-1-flag、 Cdc20-myc和 Ub-HA的质粒共转染 HEK293T细胞，做了体内泛素化分析；删除了 Zwint-1的两个D-box基序(128 RTQL131和203 RDKL206)，将突变序列亚克隆进pcDNA3-flag，与质粒pCMV-myc-Cdc20共转染，用Western blot来检测D-box缺失的Zwint-1蛋白质水平。 结果： Zwint-1蛋白水平随细胞周期时相变化而变化；Zwint-1蛋白水平在用放线菌酮孵育8 h和16 h后显著降低，在用MG132孵育6 h和12 h后蛋白水平迅速增加；免疫沉淀结果为阴性；过表达 hCdc20使 Zwint-1蛋白质含量显著减少；RNA干扰抑制Cdc20活性时Zwint-1蛋白和cyclin B显著积累；当过表达Cdc20-myc时，Zwint-1蛋白多泛素化水平显著上升；缺乏D-box基序的Zwint-1不能被Cdc20识别降解。 结论： Zwint-1的蛋白水平随细胞周期出现周期性变化；Zwint-1通过 APC/C-Cdc20途径泛素化降解；其机制是Cdc20识别Zwint-1的D-box基序。