目的：应用质粒介导的RNA沉默技术，通过体内外实验观察COX-2基因沉默对人卵巢癌细胞SKOV3生物学行为的影响。探讨COX-2基因在卵巢癌发生发展中的作用，为COX-2靶向卵巢癌治疗提供理论依据。方法：1.针对COX-2基因的靶点序列设计、合成COX-2shRNA序列，通过退火及酶切等技术将COX-2shRNA双链模板插入到质粒pGPU6/GFP/Neo中，构建重组质粒pGPU6-COX-2-shRNA。经过转化入大肠杆菌感受态细胞、筛选阳性重组菌落、扩增等操作后，将提取的重组质粒进行酶切及DNA测序鉴定。将测序鉴定结果正确的重组质粒分别瞬时转染和稳定转染入SKOV3细胞，通过RT-PCR及Western-blot等方法，检测稳定转染COX-2shRNA后，COX-2mRNA及蛋白的表达水平。2.通过体外实验观察COX-2基因沉默对人卵巢癌SKOV3细胞生物学行为的影响：MTT法检测细胞的增殖能力；平板克隆形成实验检测细胞的克隆形成能力；流式细胞术检测细胞的细胞周期变化；Transwell法检测细胞的侵袭能力。3.利用稳定转染的pGPU6-COX-2-shRNA的SKOV3细胞建立裸鼠皮下卵巢癌种植瘤模型，对细胞的出瘤时间、瘤体体积、瘤体重量进行检测，分析COX-2沉默对裸鼠皮下种植瘤生长的影响。结果:1.成功构建重组质粒pGPU6-COX-2-shRNA。2.将重组质粒pGPU6-COX-2-shRNA瞬时及稳定转染入SKOV3细胞，筛选稳定转染pGPU6-COX-2-shRNA的SKOV3细胞系。3.重组质粒pGPU6-COX-2-shRNA可有效抑制COX-2的mRNA及蛋白的表达。4.沉默COX-2基因表达可显著抑制SKOV3细胞的增殖及侵袭能力，并将细胞周期阻滞于G1期。5.与对照组比较，干扰组的成瘤时间明显延长，肿瘤体积及瘤体重量明显减少。结论:体内外实验表明，抑制卵巢癌SKOV3细胞COX-2表达可以有效抑制肿瘤的增殖、生长及侵袭，并影响细胞周期，以此基因为靶点进行的RNAi基因治疗，将有可能为人类卵巢癌提供新的策略。目的：卵巢癌，尤其是占其90%的上皮性卵巢癌（epithelial ovariancancer EOC），是女性生殖系统死亡率最高的恶性肿瘤。由于，缺乏明显的临床症状，2/3的卵巢癌患者发现时己伴有远处转移。因此，寻找卵巢癌早期诊断的标志物，对于卵巢癌患者的早期诊断及提高患者的生存率至关重要。尽管CA125及CA199的检测提高了上皮性卵巢癌的诊出率，但缺乏特异性。因此，发展一种新的花费少、敏感性好、特异性高的无创性筛查标志物，对于上皮性卵巢癌的诊断至关重要。微小RNA(microRNAs, miRNAs)是近年来新发现的一类的非编码蛋白质的小分子RNA，大约由18～24个核苷酸组成。广泛参与细胞增殖、分化、细胞周期及细胞凋亡等生理及病理过程。研究表明，miRNAs在正常组织及肿瘤组织中的表达谱存在差异。许多研究报道血液中的miRNAs可以作为癌症诊断的生物标志物。但是关于上皮性卵巢癌患者血液中的miRNA的报道却很少。本研究旨在检测上皮性卵巢癌患者血清中microRNA-92（miR-92）的表达情况，探讨血清中miR-92的表达与上皮性卵巢癌患者临床病理特征之间的关系。为寻找一种新的、无创性的用于上皮性卵巢癌患者筛查和判定预后的标志物提供理论依据。方法：采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测50例上皮性卵巢癌患者以及50例健康人群血清中miR-92表达。并对血清中miR-92的表达与临床病理特征之间的相关性进行分析。结果：miR-92作为上皮性卵巢癌筛查的标志物，具有良好的敏感性和特异性；miR-92在卵巢癌患者血清中的相对表达量显著高于及正常对照组(P<0.05)。miR-92表达随卵巢癌的临床分期和组织分级的进展呈上升趋势，而且在有淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组（P<0.05）。miR-92的表达与年龄等因素无关。结论：miR-92在上皮性卵巢癌患者血清中表达升高，提示其可能在上皮性卵巢癌的发生发展中发挥致癌基因的作用，有望成为上皮性卵巢癌的早期筛查及预后评估的特异性标志物。