由于腺苷受体（AR）亚型拮抗剂参与多种疾病的治疗,其作为有效的临床候选药物的应用越来越引起人们的关注。近年来,A₁和A_2AAR多个X-射线衍射结构为基于结构的药物设计提供了机会。在这项研究中,我们采用基于随机森林（RF）,e-Pharmacophore建模和分子对接方法的多级虚拟筛选方法,描述了新型A₁AR拮抗剂的发现历程。应用多级虚拟筛选方法来筛选Chem Div库（1492362个化合物）。在最终命中结果中,有22种化合物被选择用于对人类A₁AR进行进一步的放射性配体结合测定分析,并且18种化合物（成功率为81.82%）表现出纳摩尔或低微摩尔结合力（K_i）。然后,我们选择了6种化合物（p K_i>6）在c AMP功能测定中进一步评价它们的拮抗活性,发现它们对A₁AR具有微摩尔拮抗活性(p IC₅₀=5.51-6.38),六种化合物（p K_i>6）中的四种对A₁AR表现出非常好的亲和力（p K_i=6.11-7.13）,并且相对于A_2AAR具有非常好的选择性（大于100倍）。此外新颖性分析表明,6种化合物（p K_i>6）中的4种与现有的A₁AR拮抗剂在结构上有显著不同,因此代表了新颖的A₁AR拮抗剂。我们希望这些发现能为针对A₁AR的药物发现提供新的见解,并促进A₁AR相关人类疾病的新药研发和治疗方法的研究。