论文部分内容阅读
目的：观察供肝不同冷保存时限对胆管上皮细胞凋亡的影响；检测凋亡相关蛋白Bcl-2与Fas在不同冷保存时限供肝胆管上皮细胞表达的变化；探讨Bcl-2与Fas在胆管上皮细胞凋亡中的意义；探索冷保存下供肝的安全时限，为减少肝移植中胆道系统并发症的发生，提高肝移植成功率提供依据。方法：健康雄性SD大鼠36只，随机分6组，每组6只，未冷灌注的1组设为对照组，根据供肝灌注后冷保存时间分5组分别为1h、3h、6h、12h和24h组。UW液灌注腹主动脉及胆总管后，活体取肝脏组织保存于4℃的UW液中，按照分组分别保存不同时限。显微镜和透射电镜观察胆管上皮细胞及细胞内线粒体、内质网、高尔基体等细胞器的变化；免疫组织化学方法检测胆管上皮细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Fas的表达。结果：1、显微镜下结果：对照组、1h组、3h组的胆管立方上皮细胞均无明显变化，6h组的胆管立方上皮细胞出现轻度肿胀，12h组的胆管立方上皮细胞出现肿胀，同时存在胞浆空泡化，细胞核出现轻度增大，24h组的胆管立方上皮细胞出现肿胀，胞浆空泡化，细胞核出现肿大，汇管区出现少量炎细胞浸润；2、透射电镜观察结果：对照组、1h组、3h组胆管立方上皮细胞表面绒毛清晰可见，排列整齐，胞质内存在大量的内质网及线粒体，存在少量的高尔基体，内质网、线粒体、高尔基体形态规整，无明显变化，6h组的胆管立方上皮细胞的表面绒毛稍有紊乱，较丰富，较对照组有所减少，胞质内的线粒体、内质网、高尔基体形态规整，无明显变化，12h组的胆管立方上皮细胞绒毛减少，排列出现轻度紊乱，细胞质内的线粒体轻度肿胀，内质网扩张，高尔基体增大，24h组的胆管立方上皮细胞表面绒毛减少，排列紊乱，部分线粒体嵴出现断裂，部分线粒体空泡化改变，内质网肿胀严重，部分内质网出现空泡，少量内质网出现破裂，高尔基体大部分出现了扁平囊的扩张，同时伴随着扁平囊、大泡和小泡的崩裂溶解；3、免疫组化结果：Bcl-2在对照组、1h组、3h组、6h组的胆管立方上皮细胞中的表达较低，12h组高表达，24h组低表达；Fas在对照组、1h组、3h组、6h组的胆管立方上皮细胞中的表达低，12h组高表达，24h组低表达。结论：1、随着冷保存时间的延长，胆管上皮细胞对缺血、缺氧耐受性较肝细胞更差，提示在肝移植中胆管上皮细胞变化的要早于肝细胞。2、缩短供肝冷保存时间，可有效的降低肝移植术后胆道并发症的发生，12h内可能是肝移植的安全时限。3、凋亡相关蛋白Bcl-2和Fas在肝移植供肝冷保存胆管细胞的损伤中可能发挥着重要的作用。