目的：对北京大学第三医院住院患者分离的产生超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和质粒介导的AmpC型β-内酰胺酶(p-AmpCs)的大肠埃希菌(Eco)和肺炎克雷伯菌(Kpn)进行研究。 方法：2003年6月到2004年7月北京大学第三医院住院患者分离的全部Eco和Kpn，每患者每部位留取首个菌株，经ESBLs和p-AmpCs表型或基因型研究确定入选菌株，接合试验研究水平耐药基因转移(HGP)，琼脂扩散法研究抗生素对菌株的最低抑菌浓度(MIC)，PCR方法扩增目的基因及遗传背景，双脱氧链终止法确定序列信息，通过Blast程序比对确定酶亚型和突变，ERIC-PCR(对Eco和Kpn)结合Eco种系进化群研究确定菌株同源性，PCR方法研究整合子和qnr。 结果：(1)共计86株菌(Eco62株，Kpn24株)ESBLs和P-AmpCs单独或同时阳性。产ESBLs菌株的发生率分别是31.3％和23.5％。产P-AmpCs菌株的发生率分别是1.0％和7.1％。同时产生ESBLs和p-AmpCs菌株的发生率分别在0.5％和6.1％。86株菌合成功71株(82.6％)(其中Eco55株，Kpn16株)。(2)同时产生ESBLs和p-AmpCs菌株全部接合成功。(3)产ESBLs和/或p-AmpCs酶菌株对美罗培南的不敏感率是0，MIC<,90>在0.032 μg/ml；对头孢他啶的不敏感率在20％以上；对头孢噻肟在80％以上；哌拉西林/他唑巴坦和阿米卡星保持了对两类菌株良好的体外活性。(4)大肠埃希菌中CTX-M-1组酶有CTX-M-3(13.1％)和CTX-M-15(4.9％)；CTX-M-9组酶以CTX-M-14多见(70.5％)，另有CTX-M-24(2株，3.3％)和CTX-M-27(1株，1.6％)；此外有2株同时产生CTX-M-14和CTX-M-15，1株同时产生SHV-12和CTX-M-9，1株单产DHA-1酶，1株同时产生DHA-1和CTX-M-9。肺炎克雷伯菌中CTX-M-1组酶以CTX-M-3(30.4％)多见，另有2株分别产CTX-M-15和CTX-M-52017号标本)；CTX-M-9组酶以CTX-M-14多见(21.7％)，另有产CTX-M-9和CTX-M-24各1株；此外有1株产PER-1酶，1株单产DHA-1酶，6株(26.1％)同时产生DHA-1和CTX-M-9。(5)编号117标本产生的CTX-M类酶序列和CTX-M-3序列(GeneBank登录号：AF550415)碱基和氨基酸水平分别有99.47％和99％同源性(碱基改变是C239T和C508T(编号以起始密码ATG中A为1)；氨基酸改变是丙氨酸77缬氨酸(A77V，编号指ABL编号，下同)和脯氨酸167丝氨酸(P167S))。该序列已进行GeneBank登录(登录号是DQ223685，对应蛋白质数据库编号ABB17185)。相应抗生素对产该酶菌株MIC<,CTX>=16μg·ml<-1>,MIC<,CAZ>=256 μg·ml<-1>。该序列经G.A.Jacoby教授确认命名为CTX-M-52。(6)blα<,CTX-M>上游：不伴p-AmpCs的菌株：ISEcpl为主；少数ORF513(3个)，而伴p-AmpCs的全部7个菌株上游都是ORF513。bla<,DHA>上游：9个产生DHA-1的菌株上游都有ampR基因。(7)ERIC-PCR和Eco种系进化群等研究显示部分菌株呈一定的同源性。(8)1类整合子在84个ESBLs中检出60例(71.4％)：其可变区在ESBLs中检出54例(90.0％)，均明显高于不产生ESBLs的菌株(P<0.05)。未检出2类整合子。(9)84株产ESBLs菌株中有1株Kpn(4.2％)qnr(qnrA)阳性，Eco中没有检出。 结论：我院临床分离的Eco和Kpn中部分菌株产生ESBLs，少数产生p-AmpCs，有同时产生ESBLs和p-AmpCs的菌株存在。ESBLs酶亚型以CTX-M-14为主，p-AmpCs酶亚型都是DHA-1。检出新亚型CTX-M-52。不伴随产生P-AmpCs的菌株bla<,CTX-M>上游ISEcpl为主，blα<,DHA-1>上游多数有ampR基因。研究显示部分菌株呈一定的同源性。1类整合子及其可变区在ESBLs中的检出均明显高于不产生ESBLs的菌株。有质粒介导的喹喏酮类耐药基因存在。应加强耐药相关的表型检测和机制研究。