两类类黄酮化合物的分离及其抗癌活性研究

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类黄酮化合物是重要的天然活性化合物,本研究探讨了从植物材料中快速分离类黄酮化合物的方法和步骤:响应而优化超声波前期提取,大孔树脂中期预纯化、高速逆流色谱后期分离纯化和液质联用结构鉴定的技术流程,该技术流程可用于类黄酮化合物的制备、中药指纹图谱研究、中药的质量监测等方面,对分离得到的类黄酮化合物抗癌活性进行了初步研究。主要研究结果如下:1、应用响应面优化了超声波提取蓝果忍冬花青苷工艺以蓝果忍冬为材料,在单因素试验基础上,以甲醇提取液浓度、提取时间、液料比为影响因素,花青苷提取量为响应值,根据中心组合(Box-Beheken)试验设计原理采用3因素3水平的响应面分析法,优化提取工艺条件。其最佳超声提取工艺条件为:甲醇提取液浓度100%,提取时间60min,液料比10:1,此时得到的花青苷收量可达2.714mg/g。2.利用高速逆流色谱技术分离3种蓝果忍冬花青苷运用两相溶剂系统(叔丁基甲醚-正丁醇-乙醇-水-三氟乙酸=2:2:1:5:0.01)分离纯化蓝果忍冬中3种花青苷。利用柱层析得到的40mg初纯物,从中分离得到2.14mg矢车菊素-3,5-双葡萄糖苷、3.38mg矢车菊素-3-芦丁糖苷和12.8mg矢车菊素-3-葡萄糖苷,纯度分别为92.4%、95.8%、97.6%。利用高效液相色谱-光电二极管阵列检测(HPLC-DAD)及高效液相色谱-电喷雾离子化-多级质谱联用技术(HPLC-ESI/MSn)等技术,鉴定了这3种花青苷的结构。3.利用液质色谱联用技术构建了扁蕾□山酮类化合物指纹图谱以大兴安岭地区的传统蒙药扁蕾为材料,利用HPLC-DAD和HPLC-ESI/MSn定性、定量分析了扁蕾不同部位的化学成分,共检出11种□山酮类化合物,其中9种化合物首次从扁蕾中检测到。□山酮类化合物总含量在各部位中的分布状态为:花>叶>侧枝>主茎>根,花中总含量最高。基于扁蕾不同部位□山酮类化学成分的组成信息,探讨了其最佳的药用部位。4.矢车菊素-3-O-葡萄糖苷具有抗肝癌的活性运用MTT法和流式细胞仪分析研究了花青素对人肝癌细胞的影响。结果表明,蓝果忍冬中的主要花青素成分矢车菊素-3-o-葡萄糖营(Cy3G)对人肝癌细胞SMMC7721有强抑制作用,并能诱导肝癌细胞凋亡。
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