【摘 要】
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目的:人类蛋白质表达图集（The Human Protein Atlas）的资料显示,受体型蛋白酪氨酸磷酸酶Q（receptor type protein tyrosine phosphatase Q,PTPRQ）基因突变存在于包括结直肠癌、前列腺癌、乳腺癌等多种肿瘤细胞中。最近,我们在对一临床肺癌患者的癌组织和癌旁组织进行全基因组的外显子序列分析,发现了PTPRQ基因的无义突变,致使PTPRQ基
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目的:人类蛋白质表达图集（The Human Protein Atlas）的资料显示,受体型蛋白酪氨酸磷酸酶Q（receptor type protein tyrosine phosphatase Q,PTPRQ）基因突变存在于包括结直肠癌、前列腺癌、乳腺癌等多种肿瘤细胞中。最近,我们在对一临床肺癌患者的癌组织和癌旁组织进行全基因组的外显子序列分析,发现了PTPRQ基因的无义突变,致使PTPRQ基因理论上只表达细胞膜外部分,可能导致细胞内该酶的总活性下降。这些研究结果提示PTPRQ基因与癌症之间可能有着密切的关系。目前有关PTPRQ的研究不多,本研究以人肺癌细胞为研究模型,初步探索和确认PTPRQ对肿瘤细胞生物学行为的调控作用,为深入研究PTPRQ在肿瘤发生发展过程中的作用奠定实验基础和理论依据。方法:1.制备含pSuper Retro-PTPRQ-sh RNA-1、pSuper Retro-PTPRQ-sh RN A-2和pSuper Retro-sh RNA-EMPT重组逆转录病毒质粒,感染人肺癌细胞A549和永生化人肺上皮细胞BEAS-2B,嘌呤霉素筛选5 d,获得A549和BEAS-2B稳定细胞株,分别命名为A549-RQ1、A549-RQ2、A549-EMPT、BEAS-2B-RQ1、BEAS-2B-RQ2和BEAS-2B-EMPT。2.采用Cell Counting Kit（CCK）实验、细胞集落形成实验、细胞划痕实验、流式细胞术方法分别观察sh RNA缄默PTPRQ基因表达对A549和BEAS-2B各细胞增殖、集落形成能力、迁移、凋亡及周期分布等生物学行为的影响。3.采用Western blot方法观察sh RNA缄默PTPRQ基因表达对A549和BEAS-2B细胞内PI3K/AKT和MAPK/ERK通路关键蛋白表达的影响。4.分别使用PI3K抑制LY294002和MEK抑制剂U0126处理A549和BEAS-2B各细胞观察细胞增殖能力的变化。结果:1.A549-RQ1组和A549-RQ2组细胞中PTPRQ蛋白表达水平较A549-EMPT组细胞明显降低（P<0.01）,而A549-EMPT组细胞中PTPRQ蛋白的表达水平与A549组之间无明显差异（P>0.05）;同样,在BEAS-2B细胞的研究中发现了类似的变化趋势即BEAS-2B-RQ1组和BEAS-2B-RQ2组细胞中PTPRQ蛋白表达水平较BEAS-2B-EMPT细胞明显降低（P<0.01）,而BEAS-2B-EMPT组细胞中PTPRQ蛋白的表达水平与BEAS-2B组之间无明显差异（P>0.05）;这些结果表明A549和BEAS-2B相应的稳定细胞株构建成功。2.sh RNA缄默PTPRQ的表达后:A549、BEAS-2B细胞的增殖和集落形成能力明显减弱（P<0.01 vs空白组）,细胞的迁移能力明显增强（P<0.01 vs空白组）,细胞周期的G0/G1期的比例有所升高,S期、G2/M期的比例稍有下降（P<0.05 vs空白组）,5-FU处理后细胞凋亡率明显升高（P<0.01 vs空白组）。3.缄默细胞内PTPRQ的表达后:PI3K/AKT和MAPK/ERK通路关键蛋白AKT、MEK1/2、ERK1/2的活性均明显升高（P<0.01 vs空白组）。4.分别使用PI3K抑制LY294002和MEK抑制剂U0126处理A549和BEAS-2B细胞后,A549和BEAS-2B细胞中PTPRQ表达下降组的细胞的增殖能力均进一步减弱（P<0.01 vs空白组）。结论:PTPRQ参与肺癌细胞生物学行为的调控,与肿瘤的发生发展密切相关。但是,与我们的预期相反,PTPRQ的表达下降导致肿瘤细胞的恶性行为受抑制,提示它有有可能是肿瘤促进因子,它在肿瘤中的无义突变可能减轻其恶性程度。
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