基于SSR标记的东兴金花茶交配系统分析及其抗旱性研究

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东兴金花茶(Camellia tunghinensis Chang)是山茶科(Theaceae)山茶属金花茶组(Sect.Chrysantha Chang)的常绿灌木或小乔木,生于土山常绿阔叶林中。其分布范围非常狭窄,野生资源极少。多年来,开荒种地和滥挖乱采现象严重,致使其栖息地面积逐渐缩小,野外分布地区和数量锐减,资源濒于灭绝,亟待人类的保护。通过开展SSR分子标记对东兴金花茶进行遗传多样性和交配系统的分析,揭示东兴金花茶的交配模式,分析其遗传多样性和遗传分化,为东兴金花茶野生资源的保护措施和育种提供预见性。通过花芽切片观察花芽分化和抗旱试验,揭示东兴金花茶花器官的分化发育过程和抗性机理,为东兴金花茶异地引种栽培和繁殖提供提供科学依据。研究结果如下:1采用SSR分子标记方法对东兴金花茶4个野生居群进行遗传多样性和遗传结构分析;结果表明:利用8对SSR引物对4个野生居群总计75个体进行扩增,在居群水平上东兴金花茶野生各个居群的多态百分率(P)都是100%;有效等位基因数在3.203-3.821之间,平均值为3.652; Shannon信息多样性指数(Ⅰ)在1.274-1.455之间,平均值为1.351;观察杂合度Ho在0.807-0.867之间,平均值为0.830;无偏差预期杂合度uHe在0.677-0.739间,平均值为0.707;Nei’s值多样性指数预期杂合度He在0.648-0.716之间,平均值为0.681;各居群多态性位点的Wright固定指数F在-0.305-0.159之间,总平均值为-0.223,表明尔兴金花茶各个居群有杂合子过剩的现象;经过5%水平Bonferroni校正后,妹仔田、米吉沟、大龙沟居群显著的偏离了哈代-温伯格平衡。东兴金花茶野生居群的遗传多样性高,遗传分化主要存在于居群内部。利用8对SSR引物对4个子代居群总计159个体进行扩增。结果显示:在居群水平上东兴金花茶子代居群的多态百分率(P)都是100%;有效等位基因数在3.230-4.516之间,平均值为3.598:Shannon信息多样性指数(Ⅰ)在1.290-1.551之间,平均值为1.433;观察杂合度Ho在0.819-0.868之间,平均值为0.845;无偏差预期杂合度uHe在0.677-0.739间,平均值为0.707:Nei’s值多样性指数预期杂合度He在0.659-0.734之间,平均值为0.698;固定指数F在-0.332至-0.157之间,总平均值为-0.212,经过5%水平Bonferroni校正后,妹仔田、米吉沟、大龙沟、深沥山居群显著的偏离了哈代-温伯格平衡。2采用8对引物SSR标记检测东兴金花茶5个居群(ZWS、MZT、MJG、SHL、DLG)母代和子代的交配系统,分析各个居群的多位点异交率、单位点异交率及近交系数等参数。结果显示:东兴金花茶5个居群的tm值分别是MZT为1.002,ZWS为1.008,MJG为0.939,DLG为0.975,SHL为0.938,其大小顺序为MZT>ZWS>MJG>DLG>SHL; ts值MZT为0.981,ZWS为0.958, MJG为0.741,DLG为1.030,SHL为0.809,其大小顺序是MJG>ZWS>MZT>DLG>SHL;各个居群多位点异交率和单位点异交率都处于比较高的水平。5个居群的rpm都比较小,变幅范围在0.003-0.227之间,说明各居群内子代的双亲有可能是姊妹关系的个体都比较少,利于发生近交的关系比较少。5个居群中,居群ZWS和MZT的rt值都很大,说明5个居群变异程度都比较大。在5个东兴金花茶居群中,其rt和rpm之间的值相差都很大,说明东兴金花茶5个居群都存在亚结构。5个居群除了ZWS居群F>0外,其余居群都小于0;说明ZWS居群内有纯合子过剩现象,其余4个居群有杂合子过剩现象。3利用石蜡切片法较为完整的描绘东兴金花茶金花花芽整个分化过程,东兴金花茶花芽分为花芽未分化期、花芽分化始期、花萼分化期、花瓣分化期、雄蕊分化期和雌蕊分化期六个时期;各个时期均有重叠现象。4干旱胁迫对东兴金花茶的土壤含水率、叶片相对含水量、丙二醛含量、光合色素和荧光色素等生理生态指标产生重要的影响。与对照组土壤含水率的变化相比,CL1组,下降17.69%,说明干旱胁迫轻微;CL2下降了43.21%,CL3下降了46.63%,属于中度干旱;CL4下降比56.75%;说明干旱胁迫严重。东兴金花茶幼苗叶片的相对含水量显著降低。与DZ相比,CL1、CL2、CL3、CL4分别降低了3.90%、22.63%、31.56%、45.75%。与对照组CK丙二醛含量相比,CL1、CL2、CL3的相对含量变化不大,说明植物受干旱胁迫程度不大。随着东兴金花茶幼苗受干旱胁迫程度明显增强CL4体内的丙二醛含量明显增加,从0.02883增加至0.04035,增加了40%。与CK相比,CL1、CL2、CL3、CL4光合速率下降比例分别是7.71%、30.62%、59.47%、89.65%。气孔导度下降比例:分别是10%、34%、62%、80%,蒸腾速率下降比例:14.24%、36.59%、63.18%、82.82%。随着干旱程度加剧东兴金花茶的光合色素Chla、Chlb、Car的含量显著下降。Fo显著下降表明植物PS Ⅱ受到了明显伤害;Fm先上升后下降,但无明显的差异性变化,Fv也是先上升后明显下降,且Fv在重度干旱是下降明显,出现显著性的差异(p<0.05)
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