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第一部分 小鼠心房纤维化模型的microRNA表达谱分析目的:心房颤动（房颤）是临床上最常见的一种心律失常。已有多项研究发现,与窦性心律患者相比,房颤患者心房组织中microRNA（miRNA）分子表达有显著差异,提示miRNA可能参与了房颤的发生发展过程。血管紧张素Ⅱ持续给药诱导的小鼠心房纤维化模型被大量用于房颤相关基础分子机制的研究。但是目前尚无文献报道该模型中心房miRNA的表达情况。因此本研究通过建立小鼠血管紧张素Ⅱ模型并进行转录组测序,绘制该模型的miRNA及mRNA差异表达图谱,为拟用该模型进行心房纤维化相关研究的实验提供一些基础信息。此外,本研究将结合文献检索筛选出与心房纤维化有关的miRNA分子。方法:本实验通过迷你渗透泵持续泵入血管紧张素Ⅱ（2mg/kg/d）14天,在10-12周龄的雄性C57BL/6N野生型小鼠中建立血管紧张素Ⅱ模型。采用心脏超声证实心房扩大;采用病理实验证实心房纤维化;采用右心房短阵快速起搏诱导房颤以观察模型鼠对房颤的易感性。取小鼠双侧心房进行转录组测序（每组3只）,筛选出差异表达的 miRNA 和 mRNA 分子。采用 miRanda、TargetScan、RNAhybrid 三个 miRNA 靶点预测数据库进行靶点预测,筛选出任意两个数据库中预测一致的靶基因与mRNA差异表达基因做交集,对交集基因及差异表达的mRNA运用GO、KEGG、Reactome数据库及GESA计算方法进行功能注释。同时结合既往已发表的基于人源性心房标本的测序结果,筛选出适合应用该模型进行分子机制研究的候选miRNA。结果:本研究成功构建小鼠血管紧张素Ⅱ模型,实验组小鼠心房扩大,心房发生纤维化,房颤诱导率增高（55.6%vs12.5%）。与对照组相比,血管紧张素Ⅱ组小鼠心房样本中共有34个miRNA分子有差异,其中上调13个,下调21个;共有456个mRNA分子有差异,其中上调276个,下调180个。根据功能注释分析,差异表达的mRNA分子主要集中在细胞外基质成分和炎症激活相关通路;差异表达的miRNA靶基因集中在Ras信号通路、cAMP信号通路、TGF-β信号通路、p53信号通路、细胞外基质结构、钙离子结合、钾离子通道激活等方面。通过与已发表文献对比,筛选出6个可能参与了房颤发生发展的miRNA分子:miR-21a-3p、miR-24-5p、miR-30c-5p、miR-421-5p、miR-483、miR-212,并对其中的miR-483的靶基因进行了预测及功能注释分析发现,其可能参与了纤维化的调控。结论:本研究成功在小鼠建立了血管紧张素Ⅱ诱导的心房纤维化模型,绘制了该模型中心房miRNA及mRNA表达谱,为拟用该模型进行miRNA分子机制研究的实验提供了一定的基础信息。本研究还筛选了 6个可能参与了房颤发生发展的miRNA分子。第二部分 MiR-483-5p在血管紧张素Ⅱ诱导的心脏纤维化方面的作用目的:与窦律患者相比,miR-483-5p在房颤患者的心房及血浆中差异表达,提示可能参与了房颤的发生发展。基于前期动物实验的结果,miR-483-5p可能参与了心房纤维化的形成。因此本研究拟探索miR-483-5p在纤维化方面的作用。方法:本研究首先在血管紧张素Ⅱ处理过的小鼠原代心脏成纤维细胞中用RT-qPCR的方式探索miR-483-5p的表达趋势。通过向成纤维细胞中转染miR-483-5p模拟剂及抑制剂以在细胞内过表达或敲低该分子,Western blot法测定与纤维化密切相关的胶原蛋白COL1A1、COL3A1的表达情况。此外,采用CCK-8法来检测过表达或抑制miR-483-5p对细胞增殖的影响。结果:小鼠原代心脏成纤维细胞在血管紧张素Ⅱ刺激后,细胞内的miR-483-5p表达量下调。在原代心脏成纤维细胞中转染miR-483-5p模拟剂后发现COL3A1蛋白表达量降低,COL1A1蛋白表达量无变化;而在原代心脏成纤维细胞中转染miR-483-5p抑制剂后,COL3A1的蛋白表达量明显增加,而COL1A1蛋白表达量无变化。小鼠原代心脏成纤维细胞过表达miR-483-5p后,细胞的增殖能力较miRNA模拟剂对照组下降,而抑制原代小鼠心脏成纤维细胞的miR-483-5p,细胞的增殖能力较miRNA抑制剂对照组增强。结论:在体外血管紧张素Ⅱ刺激下心脏成纤维细胞中miR-483-5p表达降低,过表达miR-483-5p可以起到抗纤维化的作用,同时会抑制细胞的增殖能力。第三部分 生物瓣置换术后合并房颤患者的临床现状及预后分析目的:随着老龄化的进展,生物瓣置换术后合并房颤患者逐年增加。但是既往房颤相关研究很少纳入此类患者,因此该人群的临床资料较少。故本研究回顾性收集相关人群的资料对该人群的临床特征、抗凝现状、长期预后、危险因素及其变化进行分析。方法:本回顾性研究共纳入了 2010年1月至2018年12月期间在本院行生物瓣置换术且出院诊断中包含心房颤动的903例患者,通过查询医院电子数据库收集基线资料,通过查阅医院电子数据库及电话访视的方式收集换瓣术后结局事件、抗栓治疗情况及新发疾病的数据。分类变量用频率和百分比来展示,连续变量根据数据的分布特征用平均值±标准差或中位数（四分位间距）来表示。采用logistic回归模型来分析影响换瓣术3个月后口服抗凝药使用的相关因素;计算C统计值来评价CHA2DS2-VASc评分在该人群中对血栓栓塞事件的预测能力;采用Cox回归模型分析该人群全因死亡及血栓栓塞事件的相关因素。结果:纳入人群的年龄为65.6（61.9-69.1）岁,其中548例（60.7%）患者为女性。本研究纳入的人群中风湿性心脏病的患病率为63%,合并高血压29.7%、冠心病22.1%、高脂血症16.3%、既往血栓栓塞史14.2%和糖尿病12.5%。二尖瓣生物瓣置换术的患者642例（71.1%）,主动脉生物瓣置换术112例（12.4%）,同时行二尖瓣和主动脉生物瓣置换术144例（15.9%）,同时行二尖瓣和三尖瓣生物瓣置换术3例（0.3%）,2例患者同时进行了二尖瓣、主动脉和三尖瓣的生物瓣置换术。在同期外科手术方面,287例患者在术中同时行房颤外科消融（31.8%）,131例行左心耳缝扎或切除（14.5%）。基线CHA2DS2-VASc评分为0（男）或1（女）、1（男）或2（女）、≥2（男）或3（女）组的患者换瓣术3个月后口服抗凝药的比例分别为 52.3%,59%和 63.2%。与抗凝药使用的因素有年龄（OR:1.035,95%CI:1.008-1.062,P=0.01）、左房前后径（OR:1.054,95%CI:1.031-1.078,P<0.001）、风湿性心脏病史（OR:1.487,95%CI:1.052-2.102,P=0.025）、慢性肾功能不全（OR:0.203,95%CI:0.054-0.76,P=0.018）、术中房颤外科消融（OR:0.334,95%CI:0.237-0.472,P<0.001）和使用抗血小板药（OR:0.077,95%CI:0.045-0.132,P<0.001）。在 3.84（2.64-5.51）年的随访期内,有 68 例（1.8%/年）患者死亡,81例（2.1%/年）患者发生了血栓栓塞,23例（0.6%/年）患者出现了大出血。多因素Cox回归分析结果发现,与随访期内全因死亡相关的因素有:估算肾小球滤过率（HR:0.966,95%CI:0.943-0.99,P=0.005）、左室射血分数（HR:0.962,95%CI:0.931-0.993,P=0.016）、风湿性心脏病史（HR:0.516,95%CI:0.311-0.854,P=0.01）、术中房颤外科消融（HR:0.348,95%CI:0.171-0.711,P=0.004）。与随访期内血栓栓塞风险有关的因素为:术中房颤外科消融（HR:0.263,95%CI:0.133-0.519,P<0.001）、换瓣术 3 个月后口服抗凝药（HR:0.587,95%CI:0.375-0.918,P=0.019）。CHA2DS2-VASc评分作为分类变量在未服用口服抗凝药的人群中预测血栓栓塞事件的 C 统计值为 0.6（95%CI:0.511-0.689,P=0.046,类别:CHA2DS2-VASc评分为0（男）或1（女）、1（男）或2（女）、≥2（男）或3（女））。患者CHA2DS2-VASc评分增长的年化发生率为11.6%（即每年每100人中有11.6个人的CHA2DS2-VASc评分增长）。结论:1.本研究初步探索了生物瓣置换术后合并房颤患者的流行病学特征:整体年龄相对较轻、瓣膜病病因仍以风湿性心脏病为主、其他合并疾病相对较少;生物瓣膜植入以二尖瓣为主,具有一定比例的术中房颤外科消融及左心耳缝扎或切除。2.血栓栓塞事件仍然是随访期内的主要事件,需要重点关注。3.处于血栓栓塞中高风险的人群存在抗凝治疗不足的情况。4.在中国人群中证实CHA2DS2-VASc评分在评估生物瓣置换术后合并房颤人群的血栓栓塞风险方面,具有一定的临床指导意义。5.该人群的血栓栓塞危险因素处于动态变化,需要持续评估,及时采取相应的管理措施。