背景：颈椎病是临床最常见疾病之一，由于年轻白领人群的逐渐增长，高负荷工作压力及伏案工作时间的延长，颈椎病已逐渐演变成为一种社会病。其主要表现可有颈部疼痛不适、上肢酸胀麻木疼痛、身体感觉异常以及行走步态不稳、四肢肌力下降等障碍。一般来说，颈椎病的诊断并不复杂，详细的询问病史、仔细的体格检查以及相应的影像学检查结合临床医师的工作经验能准确的定位颈椎病的类型，可明确的定位神经受压损伤部位，针对病因对神经及时减压可获得良好的治疗效果。目前，我国对颈椎病的分类包括以下几种:脊髓型颈椎病、神经根型颈椎病、椎动脉型颈椎病以及交感神经型颈椎病。国内外对于脊髓型颈椎病及神经根型颈椎病的诊断及治疗已基本达成共识并已形成基本的诊疗规范。但对于交感型颈椎病，由于对其发病机制并不十分明确，因而在其诊断及治疗方面尚存有诸多争议。在全国第二次颈椎病专题座谈会中学者们将交感型颈椎病定义为：颈椎间盘退行性改变刺激或压迫颈部交感神经纤维，引起的一系列反射性症状。其临床症状以头痛、头晕、耳鸣、心动过速、视物模糊、肢体发凉等交感神经兴奋症状为主。其主要体现在局部交感神经兴奋性增高，如颈部向上的椎动脉血管外膜神经兴奋性收缩可致血管血供不足，出现头晕、头痛症状；如眼动脉支及耳动脉分支的血管神经兴奋性收缩可有视物模糊、耳鸣等症状；交感神经兴奋时胃肠部迷走神经受抑制，可表现出胃肠道反应如恶心呕吐；交感神经心内支兴奋性增高可引起心悸、心慌等。目前对于交感型颈椎病的发病机制尚不明确，有学者提出颈椎不稳是引起交感型颈椎病的原因之一，对该类患者行颈前路椎间隙减压内固定融合术后其交感神经症状常有改善，但临床上大多数交感型颈椎病患者并无明确的颈椎不稳征象，我们对其行颈前路椎间隙减压内固定术后该类患者症状也能缓解。由此看来，颈椎不稳不能解释所有出现交感性症状的颈椎病因。我们对多数伴交感神经症状颈椎病患者行颈椎MRI检查，发现该类患者大多有颈椎生理曲度变直、多节段颈椎间盘膨出压迫相应后纵韧带，此现象引起我们对交感型颈椎病的重新思考。多年来，学者们发现颈部交感神经分布较为丰富，其中椎旁结构包括椎体、椎间盘、前纵韧带、后纵韧带等，均有交感神经纤维支配。课题组在前期的国家自然科学基金课题研究中利用新西兰大白兔做颈椎后纵韧带神经分布研究，乙醛酸化学染色标记交感神经表达的神经肽Y可观察到颈椎后纵韧带含有丰富的交感神经纤维。更有学者提出，炎症等因素刺激或局部环境改变可导致神经纤维增生，对神经纤维表达的多肽分析是检测神经纤维数量的一种有效方法。目的：鉴于当前诸多学说不能满意解释颈交感神经紊乱症状，而常规的颈前路减压手术在切除了椎间盘及后纵韧带可使部分患者交感神经症状得以改善，我们设想是否颈后纵韧带受压与此类患者一系列交感神经兴奋或抑制症状有关。颈后纵韧带受压后其上分布的交感神经纤维是否有所变化，以及该变化是否会引起颈部相关的不适反应。本实验中我们拟建立颈椎后纵韧带受压动物模型，并于模型建立成功后饲养数周并取出新鲜的后纵韧带组织进行化学染色观察其上神经分布形态，并且通过对比格犬后纵韧带组织的提取液进行测量，检测神经纤维在后纵韧带组织中的含量，精确计算不同动物模型颈后纵韧带神经纤维含量的差异。方法：以往在神经组织的疾病诊断和科研中，应用常规HE染色可以观察到神经元及神经纤维的全貌，但是它们的细微结构和某些特殊成分需要特殊的染色方法才能显示。交感神经属肾上腺能神经，它能够释放单胺类神经递质，因此可以用现实单胺类神经递质的方法研究交感神经纤维分布。神经肽Y可由交感神经纤维表达，我们可通过借助神经肽Y的染色观察后纵韧带交感神经纤维的形态。放射免疫技术为一种将放射性同位素测量的高度灵敏性、精确性和抗原抗体反应的特异性相结合的体外测定超微量(10-9～10-15g)物质的新技术。我们课题组在前一课题中对新西兰大白兔颈椎后纵韧带神经纤维表达的神经肽Y标记并应用乙醛酸染色荧光显微镜进行观察，发现新西兰大白兔颈椎后纵韧带分布有丰富的交感神经。本实验中我们选取成年健康的比格犬作为实验动物，实验步骤可分如下三步。第一步为动物模型建立：订购16只健康成年雄性比格犬，对其进行随机分为两组各八只，实验组采取颈前路C4/5椎间盘髓核组织取出后回植入该椎间隙的方法，并适当向后挤压后纵韧带组织，造成比格犬颈椎后纵韧带受压模型；假手术对照组采取相同的颈前路显露方法，但仅限显露C4/5椎前结构，并不处理该椎间隙。第二步为两组动物经一段时间饲养过后，每组随机选出两只比格犬，颈前路手术取出后纵韧带组织，对其进行免疫组织化学染色形态学观察。第三步为对两组剩余的12只比格犬行颈前路手术，对取出的后纵韧带组织进行神经肽Y标记的放射性免疫学定量分析。结果：通过实验我们发现比格犬颈椎体后缘有较为宽厚的后纵韧带，其宏观形态呈倒三角形，化学染色及神经放射性免疫测量过程顺利。实验结果我们得出：（一）比格犬颈椎后纵韧带受压模型的建立成功、可靠，比格犬颈椎体形态与人类相似，脊柱序列完整，可操作性高，且比格犬饲养方便、手术耐受性高。（二）对随机选出的四只比格犬C4/5椎间隙后纵韧带组织行免疫组织化学染色分析，发现比格犬后纵韧带分布有较为丰富的交感神经纤维，组间比较发现每高倍镜视野下后纵韧带压迫组比假手术对照组有更为稠密的神经纤维表达。（三）对两组12只比格犬C4/5椎间隙后纵韧带神经纤维表达的神经肽Y行放射性免疫分析，其结果为：后纵韧带受压组含有较明显的交感神经纤维增生（NPY浓度分别为：61.78pg/100μl；73.22pg/100μl；63.67pg/100μl；79.78pg/100μl）；65.33pg/100μl；68.81pg/100μl，与假手术对照组(NPY浓度分别为：34.31pg/100μl；42.91pg/100μl；35.23pg/100μl；39.72pg/100μl；36.41pg/100μl；40.62pg/100μl)相比具有统计学差异（统计软件为SPSS13.0，两独立样本t检验，P<0.001）。结论：从比格犬饲养容易、颈前路手术解剖结构清晰、比格犬手术耐受力良好、内固定牢靠及后纵韧带取材方便等特点可知比格犬适宜建立颈椎动物模型。对犬后纵韧带行免疫组化染色分析可知比格犬颈后纵韧带含有较为丰富的交感神经纤维，后纵韧带受压后其上交感神经纤维增生，神经放射性免疫神经肽Y定量检测提示后纵韧带受压组比格犬后纵韧带神经肽Y含量显著高于假手术对照组后纵韧带神经肽Y的表达。由此我们可以设想在临床上交感型颈椎病患者在长期多节段颈椎间盘膨出压迫后纵韧带的情况下，颈椎后纵韧带上交感神经纤维是否也出现异常增生，为下一步研究后纵韧带神经异常传导通路奠定了基础。