论文部分内容阅读
背景：胶质瘤是位于颅内最常见的原发性肿瘤[1]。胶质瘤是一种死亡率仅次于胰腺癌和肺癌的高发的神经系统肿瘤，其五年的生存率小于5％。其发生发展是一个复杂的过程。为了更好的寻求干预胶质瘤发生发展的途径，我们结合表观遗传学寻找其发病机制及干预方法。胶质细胞源性神经营养因子GDNF（glial cell line-derived Neurothropic factor）[2]属于转化生长因子（TGF-β）超家族，在其发生发展过程中起到了重要作用，也成为了近年来这一领域的研究热点之一。本实验室研究结果表明GDNF基因在胶质瘤组织中转录表达显著升高，这与国外的一些研究结果不谋而合。因此，GDNF被公认为是胶质瘤发生发展的一个重要因素。本论文的前言部分就GDNF的生物学意义和表观遗传学进行了阐述。论文第二部分对人脑胶质瘤GDNF基因H3组蛋白乙酰化情况进行了阐述。本实验室运用染色质免疫共沉淀chip-pcr方法[3]分别对正常脑组织、低级别胶质瘤、高级别胶质瘤内GDNF基因启动子区H3组蛋白乙酰化情况进行了检测。研究结果表明GDNF基因在胶质瘤组织中表达显著升高。为了进一步探索GDNF基因在胶质瘤组织中高表达的原因，我们对胶质瘤组织中GDNF基因启动子区H3组蛋白进行了乙酰化检测。并用去乙酰化酶丁酸钠对GDNF基因H3组蛋白乙酰化作用干预后，我们推测GDNF基因启动子区H3组蛋白乙酰化改变与GDNF基因在胶质瘤组织中高表达有密切的联系。目的：1、检测人脑胶质瘤较正常脑组织GDNF基因转录表达情况2、明确GDNF启动子区在人脑胶质瘤中H3赖氨酸残基9位乙酰化(H3K9Ac)情况，探讨其对于GDNF在胶质瘤中表达的影响。方法：RT-PCR检测各组中GDNF mRNA的表达；建立基于Real-time PCR分析的染色质免疫共沉淀（ChIP）方法，检测12例胶质瘤与6例正常脑组织中GDNF基因启动子区H3组蛋白乙酰化情况。结果：1、Real-time PCR验证人脑胶质瘤GDNF mRNA的表达示转录水平随级别的增高而增高，且低级别组、高级别组与正常组之间存在显著的统计学差异（p﹤0.05）。2、启动子区的H3组蛋白乙酰化水平，正常组与低级别组和高级别组之间比较均有显著性差异（P﹤0.05），且低级别与高级别之间也有显著性差异。3、应用NaB干预后，GDNF基因启动子区H3组蛋白乙酰化修饰水平开始升高，加入5μmol的NaB时GDNF启动子区乙酰化水平显著升高，GDNF mRNA表达也相应增高。结论：在人脑胶质瘤组织中，GDNF启动子区发生了H3组蛋白高乙酰化修饰，这种修饰、与GDNF基因的表达在胶质瘤中的高表达密切相关。