转基因五指山小型猪在诱导Ⅰ型糖尿病模型及其后代的红色荧光蛋白基因表达上的应用

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转基因克隆技术在改造动物原有基因以生产新的植物品种,和动物品种方面与传统的育种方式相比较,传统育种方式要经过一个漫长的过程才能筛选出一中新型的优良品种。目前,研究者已经成功的用转基因克隆技术生产各种的不同的动物,例如:绵羊,牛,猪,兔子,等…转基因克隆技术能在短时间内为科学研究生长出一个适宜的品种,缩短育种的时间。转基因克隆技术已经广泛的应用在生产生活中的各个领域,在新品种选育,人类疾病的先关研究等方面已是一种强有力的工具。  一、用四氧嘧啶诱导克隆五指山小型猪Ⅰ型糖尿病模型。利用不同浓度四氧嘧啶诱导克隆五指山小型猪Ⅰ型糖尿病模型,以探索克隆动物构建糖尿病模型应用于糖尿病治疗及相关研究。分别采用不同浓度的四氧嘧啶处理克隆五指山小型猪;选取健康的克隆五指山小型猪,分为一次注射组,和对照组。禁食16小时后,将10%浓度的四氧嘧啶通过耳缘静脉注射;一次注射组,B组分别按170mg/kg注射一次,对照组注射适量的生理盐水。每隔24小时静脉采血检测血糖、胰岛素水平、体重,一周后进行糖耐实验,病理学检测。B组(12.18±0.70 mmol/L)中的170mg/kg注射剂量血糖显著升高,空腹血清胰岛素 B组(5.194±0.368?IU/mL)低于对照组(7.578±0.539?IU/mL),并且糖耐量异常,胰腺组织切片观测到胰腺胰岛β细胞受损。基于以上实验我们制作的克隆五指山小型猪Ⅰ糖尿病模型可以用于糖尿病药物测试和新的治疗方法的研究,并且对糖尿病治疗的研究有着重大意义。  二、红色荧光蛋白转基因五指山小型猪及其后代的外源基因表达。对红色荧光蛋白转基因五指山小型猪及其后代的血液生理指标,和红色荧光基因表达情况进行分析。探索红色荧光蛋白转基因五指山小型猪的繁殖能力,及其外源基因表达稳定性。实验方法将pCX-mRFP1转染猪耳成纤维细胞,作为供核细胞,采用体细胞核移植(SCNT)技术,生产的红色荧光转基因五指山小型猪F0。再将红色荧光猪与非转基因五指山小型猪进行杂交,产下杂交的具有红色荧光蛋白基因的后代 F1代,并对其进行荧光分析和血液样本常规分析。在红色荧光蛋白基因阳性的五指山小型猪F1的外观与母本F0表现一致,呈鲜艳的粉红色;血液样本分析显示 F0代,F1代的血液生理指标无显著性差异;红色荧光蛋白基因阳性的五指山小型猪 F1解剖,各种组织和器官在手提式长波紫外灯下和野生型的非转基因五指山小型猪的组织和器官比较;其中一部分组织被制作成组织切片在荧光显微镜下进行荧光分析;上述实验结果显示红色荧光蛋白基因阳性的五指山小型猪 F1与母本 F0表现一致,mRFP1基因稳定的遗传到 F1代中并在器官组织中有效地表达。我们生产的红色荧光蛋白转基因猪,中的红色荧光蛋白基因,能够稳定的遗传给F1代,并且在F1代中高度的表达。在未来我们利用杂交育种技术扩大红色荧光蛋白转基因五指山小型猪的数量,已建立一个新的种群。将被应用于研究癌症的治疗,目的基因跟踪,制作动物疾病模型等,由于其体型娇小,外观鲜艳,漂亮,易于饲养,也可也可适用作为新型时尚宠物。具有较高的科研和市场经济价值。
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