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第一部分 血清Apelin在多囊卵巢综合征患者中的特点目的:探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者中血清Apelin特点,及其与性激素、代谢指标的相关性。方法:选取2015年9月至2017年9月于中山市博爱医院生殖中心就诊的不孕患者共60例,按照是否诊断PCOS,设为PCOS组30例,对照组30例。采用ELISA检测血清Apelin水平,同时检测空腹血清葡萄糖(FPG)、空腹胰岛素(FIns)及性激素水平,计算体质量指数(BMI)及胰岛素抵抗指数稳态模型(HOMA-IR),并分析患者血清Apelin水平与性激素、代谢指标的相关性。结果:PCOS组患者的血清Apelin水平较对照组显著升高[(3.35±1.22)vs(1.95±0.83)μg/L,P<0.05],PCOS 组的 HOMA-IR 也显著高于对照组[(3.87±1.41)vs(2.12±0.91)μg/L,P<0.05],Pearson 相关分析表明,PCOS 组血清Apelin 水平与 BMI 及 HOMA-IR 正相关(P<0.01)。结论:血清Apelin在PCOS组显著升高,并且其升高与BMI及HOMA-IR存在密切联系。第二部分miR-424靶向调节Apelin和APJ表达调控人卵巢颗粒细胞瘤KGN的增殖与凋亡目的:本研究旨在探讨miR-424在调节Apelin表达和人类卵巢颗粒细胞瘤KGN功能中的作用。方法:选取2017年10月至2018年12月就诊中山市博爱医院生殖中心,行IVF-ET治疗的69例不孕患者,按照是否确诊PCOS,设为PCOS组32例,对照组37例,收集血清、卵泡液和颗粒细胞样本。另从瑞肯生物来源中心(Ricken,日本)获取人卵巢颗粒细胞瘤KGN,通过特定的模拟物和抑制剂的转染改变miRNAs在KGN中的表达。用ELISA测定Apelin浓度,用qRT-PCR法分析基因和miR-424的表达,Western blot法测定蛋白质含量,双萤光素酶测定验证miR-424 与基因序列的相关性。Apelin 基因 的过表达是由 LV-003 质粒介导细胞转染促进的,采用MTS方法对KGN细胞增殖进行分析,流式细胞术测定细胞周期和凋亡。结果:1、Apelin在PCOS患者血清和卵泡液中的浓度显著升高(P<0.05),伴随着APJ(Apelin受体)表达的上调和miR-424表达的抑制。2、miR-424模拟物通过靶向针对Apelin和APJ3’-UTR区域,抑制了 KGN细胞中的Apelin和APJ表达,miR-424抑制剂又将其作用逆转。3、miR-424通过下调Cyclin-D/E表达来抑制KGN细胞增殖和细胞周期进程,miR-424通过诱导Caspase-3活化,促进KGN细胞凋亡。4、miR-424通过直接抑制apelin基因表达,调节KGN细胞增殖和凋亡,但不抑制Apelin肽活性。结论:Apelin和APJ的表达受到miR-424靶向调控,抑制KGN细胞的增殖,促进其凋亡。