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目的母体代谢因素与围产期结局的关系已经逐渐受到重视,但尚缺乏有效预测妊娠结局的血清标志物。本研究主要探讨血清碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)与围产期不良结局——大于胎龄儿(Large for Gestational Age,LGA)的关系,明确妊娠早期高水平ALP是否可作为LGA发病的预测因子。同时,从妊娠糖尿病(Gestational Diabetes Mellitus,GDM)孕妇存在的胰岛素抵抗和胰岛功能障碍这个角度,探究其异质性对于围产期不良结局的影响。在临床研究的基础上,我们进一步探究了调节妊娠糖代谢的新机制,旨在通过观察激活胆汁酸G蛋白受体(Takeda G protein-coupled receptor 5,TGR5)对巨噬细胞极化及迁移功能的影响,探索新的改善孕期糖代谢的机制。方法建立前瞻性队列,在孕13-16周对孕妇行一般生化指标的检测,孕24-28周行75g口服葡萄糖耐量试验筛查GDM,而后进行血糖监测和产后结局随访;分析214例糖耐量正常孕妇早期生化指标与产后新生儿结局的关系,以及206例GDM患者,根据其疾病异质性,分为GDM-resistance(n=35)、GDM-dysfunction(n=43)、GDM-mix(n=79)三组,分析其胰岛素分泌和胰岛素抵抗的异质性及其与妊娠结局的关系。基础研究中,我们提取GDM孕鼠的骨髓来源细胞,并诱导其分化为成熟小鼠原代巨噬细胞,并观察激活巨噬细胞TGR5后,对其极化功能和迁移功能产生的影响,Real-time PCR检测相关炎症因子和趋化因子的表达变化。流式微珠阵列法和ELISA检测细胞上清中炎症和趋化因子的水平。Transwell检测细胞迁移能力。Western blot法检测激活TGR5后,前蛋白转化酶1(Proprotein Convertase 1/3,PC1/3)等表达改变。结果本组214例糖耐量正常的孕妇中,23例出现LGA;LGA组孕妇(n=23)孕期早期血清ALP水平明显高于non-LGA组孕妇(n=191)(48±14 vs 42±11;P=0.008)。Logistic回归分析表明,在校正其他混杂因素后,ALP仍与LGA发病独立相关(OR 1.05,95%CI:1.00,1.11,P=0.04)。在GDM异质性研究中,发现同时合并胰岛素抵抗和胰岛功能障碍的GDM孕妇较糖耐量正常的孕妇更易发生LGA(P=0.008)和围产期不良结局(P=0.005)。但校正了孕前体重指数等混杂因素后,这种差异就消失。基础研究中,激活TGR5后发现,原代巨噬细胞IL-1β、IL-6和TNF-α基因的m RNA水平较脂多糖刺激组明显下降(All P<0.01);趋化因子CCL2、CCL4、CCL5以及CCL7的m RNA水平同样较脂多糖刺激组明显下降(All P<0.05);而后,检测细胞上清中的IL-6、TNF-α和MCP-1水平,在TGR5激活后,明显低于脂多糖刺激组(All P<0.05);同时CCL2、CCL3和CCL4水平也较脂多糖刺激组明显降低(P<0.001);激活TGR5使巨噬细胞迁移能力较空白对照组亦明显下降(P<0.001);最后,激活TGR5能明显上调抗炎作用明显的蛋白因子PC1/3的表达(P<0.05)结论孕期中早期血清ALP水平的升高与LGA发生风险独立相关,可作为预测LGA发生风险的生物标志物。GDM孕妇在胰岛素抵抗和胰岛功能障碍方面表现出的异质性对围产期结局可产生一定的不良影响。激活巨噬细胞TGR5受体能有效抑制其向M1类型极化,也能抑制其趋化因子的表达及其迁移能力,而这可能通过上调PC1/3的表达实现。
