蛇足石杉(Huperzia serrata(Thunb)Trev.),系石杉科(Huperiaceae)石杉属(Huperzia)多年生蕨类植物,民间常用于治疗痈疖、跌打损伤、肿毒等症。蛇足石杉内含石杉碱甲,为可逆性胆碱酯酶抑制剂,对于预防和治疗老年性痴呆、记忆力减退和重症肌无力具有显著的疗效。目前国际上己将石杉碱甲列为第二代乙酰胆碱酯酶抑制剂之一,是治疗老年性痴呆(AD)的特效药。本研究以野生蛇足石杉为材料,初步建立蛇足石杉离体培养再生体系,为以后的离体快繁研究提供指导；同时从外植体中分离出了3种内生真菌,测定其ITS序列进行分子鉴定；定性检测了3种内生真菌是否产石杉碱甲,并对其抗植物病原真菌活性进行了检测,为进一步研究提供参考。主要研究结果如下：1.蛇足石杉离体培养研究(1)获取无菌外植体的最佳灭菌条件。外植体洗净后在O.O1mol·L-1HCl+5%NaC10+0.0024mol·L-1柠檬酸配成的溶液中浸泡1 min,再依次浸入70%乙醇中1 min,5%NaClO中15 min,7%H2O2中10 min可得到最佳表面灭菌效果,40%的外植体没有微生物污染迹象；再经0.5 mg·L-1孔雀石绿+50,100 mg·L-1 AAS联合使用时,可获得最佳的内生菌灭菌效果,20%的外植体无感染。(2)外植体继代培养后可产生不定芽。无菌外植体培养约90 d后,开始出现生长变化,主要有两种变化类型：一种为外植体本身没有出现明显的生长,但靠近茎基部的同一节点处开始分化出新芽；另一种变化为外植体有少量的生长,且在茎的上部形成多个小不定芽,不定芽能剥离母株独立生长,5mm以上的不定芽接种到1/2MS+30g·L-蔗糖的培养基上,存活率可达90%,120d后生长为2-3cm的幼苗。(3)无菌苗诱导产生不定根。对无菌苗主枝的顶芽以及主枝上产生的不定芽进行了生根诱导,在基本培养基中添加mA1.0mg·L-1+2.0mg·L-1谷氨酰胺,对两种类型的无菌苗的生根有明显的促进作用,其中在1/3MS基本培养基上添加的效果最好,不定芽的生根率可达90%,顶芽的生根率也可达30%。2.内生真菌研究(1)从蛇足石杉中分离出3种内生真菌,测定ITS序列对其进行鉴定。3种内生真菌,分别命名为NSZJ-Ⅰ, NSZJ-Ⅱ,NSZJ-Ⅲ,经鉴定NSZJ-Ⅰ属座囊菌纲(Dothideomycetidae),煤炱目(Capnodiales),小球壳科(Mycosphaerellaceae), Pseudocercosporella属。NSZJ-Ⅱ在Genebank由BLAST结果相似序列较少,初步鉴定属于座囊菌纲(Dothideomycetidae),煤炱目(Capnodiales). NSZJ-Ⅲ属于座囊菌纲(Dothideomycetes),座囊菌目(Dothideales), Hortaea属。(2)3种内生真菌产石杉碱甲的定性检测。经薄层色谱法(TLC)测定,3种内生真菌均不产石杉碱甲。(3)3种内生真菌抗植物病原真菌活性检测。取油茶叶枯病原真菌(小孢拟盘多毛孢菌Pestalotiopsis microspora)、油茶炭疽病原真菌(胶孢炭疽菌Calletotrichum gloeosporioides)、油茶软腐病原真菌(伞座孢菌Agaricodochium camellia)、核桃腐烂病原真菌(壳囊孢菌Cytospora juglandis)四种植物病原真菌为实验菌,经测定,NSZJ-Ⅰ对四种植物病原真菌抗菌活性较弱；NSZJ-Ⅱ对油茶叶枯病原真菌有较好的抗菌活性,抑制率达100%；NSZJ-Ⅲ对油茶叶枯及炭疽病原真菌有较好的抗菌活性,抑制率达100%。