江苏湿地越冬野鸭中A型流感病毒的检测及基因序列分析

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参考Lee等报道的NP基因的引物,建立A型流感病毒的RT-PCR检测方法,检测2004年10月到2005年3月从江苏省的洪泽湖、高邮湖、盐城湿地自然保护区内13种野鸭采集的256份泄殖腔拭子,检测结果显示,52.34%(134/256)的野鸭带有A型流感病毒,其中绿头鸭、花脸鸭、白秋沙鸭、翘鼻麻鸭大于等于80%,表明在江苏省越冬的野鸭流感病毒带毒率非常高。通过SPF鸡胚尿囊腔接种法进行病毒分离,分离到23株病毒,经国家禽流感参考实验室鉴定为A型禽流感病毒。鸡胚分离率为8.98%(23/256)。 将绿翅鸭分离株A/Common Teal/XuYi/04和斑嘴鸭分离株spdkYC1905、spdkXy2305、spdkXy2505四株分离株的NP基因330bp片断RT-PCR扩增克隆测序,序列在GenBank上Blast,结果显示,A/Common Teal/XuYi/04与人源及猪源的H3N2同源性为95%;spdkYC1905与1997年香港H5N1同源性为96%;spdkXy2305与2004年东南亚暴发的H5N1型HPAIV同源性高达99%;spdkXy2505与2000年以来我国香港、广西等地各种来源的H5N1同源性为96%。说明江苏湿地野鸭中存在的流感病毒具有重要的公共卫生意义,同时对畜牧业造成潜在威胁。 对禽流感病毒绿头鸭盱眙分离株maXY804的HA、PB2、NP、M、NS基因进行克隆测序,序列在GenBank上Blast,结果显示,在GenBank数据库中没有与maXY804的HA、PB2、NP、M、NS基因完全匹配的序列。上述蛋白基因与不同地区的流感病毒分离株有不同的亲缘关系。NP、NS基因与欧洲的流感病毒同源性高,M、PB2与我国沿海地区分离的流感病毒同源性高。 对10株本实验分离的流感病毒分离株的M基因进行分析,结果表明,这10株分离株的M基因可以分为两簇:第一簇包括7株:绿头鸭分离株maGY3305、maXY804;斑嘴鸭分离株spdkYC1905、spdkXy2505;花脸鸭分离株btHZ1605、btXY1805及普通秋沙鸭分离株gsdHZ705;第二簇包括3株:花脸鸭分离株btXY1705、斑嘴鸭分离株spdkXy2305和绿头鸭分离株maGY3105。第一簇与意大利火鸡中的低致病力的tkIt02(H7N3)在同一进化分枝上,同源性为97.6%。第二簇btXY1705、spdkXy2305、maGY3105与从鄱阳湖健康野鸭中分离的禽流感病毒midkJx05(H5N1)同源高达99.3%~99.8%;与引起青海湖斑头雁暴发HPAIV
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