以金属有机骨架化合物NH2-MIL-53(Al)为荧光探针的分析方法研究

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金属有机骨架化合物(metal-organic frameworks,MOFs)是一种通过金属离子或金属团簇与有机配体之间形成的配位键自组装而成,且具有一定周期性网络结构的骨架材料。MOFs具有许多优异的特点,例如多样的化学组成、可调的孔径大小、极大的比表面积、可调节的活性位点以及便于修饰的金属节点和有机配体。这些特点使其在气体储存和分离、生物医学成像、催化、药物递送、化学分离等领域受到广泛的关注。此外,MOFs具有优越的负载性能、较好的比色和荧光(fluorescence,FL)响应,因此在光学传感领域也取得了令人瞩目的成绩。本研究采用水热合成法制备了一种具有FL性质的MOFs NH2-MIL-53(Al),并且基于其FL性质,建立了荧光免疫分析方法(fluorescence immunoassay,FIA)和双位点识别FL分析方法,分别用于霉菌毒素和致病菌的检测。具体研究内容如下:1.基于MOFs NH2-MIL-53(Al)的碱水解行为构建荧光免疫分析方法检测黄曲霉毒素B1本研究通过简单的水热合成法,以2-氨基对苯二甲酸(2-aminoterephthalic acid,NH2-H2BDC)为有机配体,铝离子为金属离子,合成了一种具有FL性质的MOFs NH2-MIL-53(Al)。该材料在水溶液中具有良好的稳定性和均一性,此外,在碱性介质中,它可被快速水解,并释放出大量的FL配体NH2-H2BDC,以产生强烈的FL信号,因此它非常适合被用作信号探针来示踪生物识别事件。在该研究中,我们基于MOFs NH2-MIL-53(Al)的碱水解行为,在微孔板平台上建立了一种竞争性免疫分析方法,通过将其作为FL信号探针来检测黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)。AFB1的检测范围为0.05 ng m L-1-25 ng mL-1,检测限为0.03 ng m L-1(3σ)。本方法对AFB1具有较好的选择性,其它霉菌毒素对该方法的检测几乎没有干扰。该方法已成功应用于薏米和远志的加标样品检测,回收率在83.00%-114.00%之间。并且用于长有黄曲霉菌苍耳子中的AFB1的检测,所得结果与HPLC基本一致,相对误差在-14.21%-3.49%之间。本方法具有灵敏度高、特异性好和操作简单等优点,在实际应用中表现出良好的可靠性。2.基于MOFs NH2-MIL-53(Al)的碱水解行为构建双位点识别的荧光分析方法检测金黄色葡萄球菌采用上一章中所制备的MOFs NH2-MIL-53(Al)建立了一种基于双位点识别模式的FL分析方法,用于检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)。在该方法中,选用替考拉宁(teicoplanin,TEI)和猪免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,IgG)作为分子识别试剂,将MOFs NH2-MIL-53(Al)标记的TEI作为FL信号探针,利用猪IgG对S.aureus细胞壁表面A蛋白的特异性识别作用,结合磁分离技术构建了一种用于检测S.aureus的FL分析方法。研究结果表明,本方法对S.aureus的检测范围为3.3×103-3.3×107 CFU mL-1,检测限为5.3×102 CFU mL-1(3σ)。本方法对S.aureus具有较好的选择性,革兰氏阴性菌和其它革兰氏阳性菌对检测几乎无干扰。该方法成功应用于石榴绿茶、葡萄糖注射液和唾液的加标样品检测,回收率在97.70%-115.10%之间。该方法具有灵敏度高,检测时间短和操作简便等优点,具有较好的应用潜力。综上所述,本论文利用MOFs NH2-MIL-53(Al)水解产物的FL性质,结合FIA和双位点识别的FL分析方法,构建了用于AFB1和S.aureus检测的新方法。以上方法具有灵敏度高,特异性强和操作简便等优点,在食品安全、药品质量控制等领域具有较好的应用前景。
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