论文部分内容阅读
近年来,随着人们对环境问题及食品安全问题越来越重视,逐渐认识到在农产品的病虫害防治过程中化学农药使用的危害,生物防治逐渐受到重视,而寻求广谱、高效的生防菌株是生物防治过程中重要的一部分。以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、樱桃树“黑疙瘩”病疑似病原菌和植物病原真菌为指示菌株,通过平板对峙法及BY菌和B1菌发酵液的4种机溶剂提取液的抑菌实验,对实验室保存的两株拮抗菌BY和B1进行抗菌谱筛选。结果表明BY菌和B1菌的无水乙醇提取物水溶液对细菌都有抑菌活性,但是只有BY菌发酵液无水乙醇提取物水溶液对植物病原真菌有较好的抑制作用,而B1菌发酵液无水乙醇提取物水溶液对植物病原真菌无抑制作用。因此,获得抗菌谱较广的拮抗菌株BY,对BY菌通过形态学观察、生理生化测定和16S rRNA基因测序分析,确定BY菌为类芽孢杆菌属（Paenibacillus sp.）。拮抗菌BY发酵液无水乙醇粗提物经sevag法除蛋白后,薄层层析（TLC）、全波长扫描定性分析,确定BY菌发酵液无水乙醇提取物为多糖类物质。进一步经DEAE-23纤维素柱层析、葡聚糖凝胶G-100柱层析得到有抑菌活性的纯化多糖PoⅠ1a,对多糖PoⅠ1a经高效凝胶渗透色谱（HPGPC）确定分子量为9.78KDa,并通过气相色谱分析（GC）分析多糖PoⅠ1a是由鼠李糖（5.81%）、岩藻糖（1.77%）、阿拉伯糖（5.29%）、甘露糖（13.90%）、葡萄糖（44.80%）、半乳糖（28.43%）组成。拮抗菌BY发酵液的无水乙醇沉淀的团状物质PoⅡ对羟自由基有清除功能,进一步通过DEAE-23纤维素柱层析得到组分PoⅡ1和组分PoⅡ2,并且两种组分都具有羟自由基（·OH-）清除和DPPH清除功能;通过正交试验确定拮抗菌BY培养基最佳碳源为麦芽糖（20 g/L）,氮源为NaNO3（0.5 g/L）,pH值为6,装液系数为0.4时,拮抗菌BY发酵液无水乙醇提取物抑菌作用最强。温度在30-70℃时,pH值在2-7时对拮抗菌BY发酵液无水乙醇提取液的抑菌活性无影响。针对陕西省白鹿原地区樱桃树“黑疙瘩”病,选取陕西省西安市灞桥区狄寨街田园现代农业樱桃园作为田间实验基地,进行田间防治探究。第一批实验选取5处“黑疙瘩”病的病斑作为实验组Da、Db、Dc、Dd、De,分别做刮去病组织表皮的处理和不处理两种方式,在病组织处涂不同防治液（1号、2号、3号、4号防治液）,不同时间观察防治结果。由结果可知,刮去病组织的表层防治效果较好,1号防治液和4号防治液的效果较好。第二批实验选取4处不同樱桃树“黑疙瘩”病斑D1、D2、D3、D4作为实验组,另选取4处不同樱桃树“黑疙瘩”病斑CK1、CK2、CK3、CK4作为对照。实验组的病组织分别做刮去病组织表皮的处理和不处理两种方式,并且分别涂1号和4号防治液。对照组做刮去病组织表皮的处理和不处理,喷无菌水。实验组在不同程度上病情得到抑制,基本无流胶现象,而对照组病情变严重。拮抗菌BY发酵液对樱桃树“黑疙瘩”病的防治有一定的防治效果。但是,防治周期较长,对于病情较轻的樱桃树“黑疙瘩”病防治效果较好,因此BY发酵液樱桃树“黑疙瘩”病的防治以预防为主。