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(一)环磷酰胺(CTX)损伤小鼠卵巢功能模型的建立目的:摸索建立小鼠卵巢功能损伤模型的适宜环磷酰胺剂量。方法:选取具有正常动情周期的雌性7周龄昆明小鼠25只,随机均分为5组:A组(生理盐水对照)、B组(CTX 50mg·kg-1·d-1)、C组(CTX 100mg·kg-1·d-1)、D组(CTX 150mg·kg-1·d-1)、E组(CTX 200mg·kg-1·d-1),均连续腹腔注射7天。每天行小鼠阴道脱落细胞检查,同时每天记录小鼠体重及饮食、活动、毛发等一般状况。停药10天后取小鼠双侧卵巢,进行卵巢组织切片及HE染色,观察卵巢组织形态并计数卵泡。结果:使用环磷酰胺的各组小鼠均出现体重的下降(P<0.05,与对照组相比)及一般状况变差,动情周期变得紊乱,使用环磷酰胺使小鼠卵巢结构发生改变,闭锁卵泡数增加(P<0.05,A、B、C三组间比较),且呈现剂量相关性。D组(CTX150mg·kg-1·d-1)及E组(CTX 200mg·kg-1·d-1)在用药期间及停药后出现实验动物死亡。结论:使用CTX 100mg·kg-1·d-1连续腹腔注射7天的方案可建立小鼠卵巢功能损伤模型,效果更为明显且不引起实验小鼠死亡。(二)选定剂量下GnRHa对小鼠卵巢功能的抑制作用目的:观察所选定的GnRHa剂量是否足以产生明显的卵巢功能抑制,为后续实验提供剂量参考。方法:选取具有正常动情周期的雌性昆明小鼠12只,随机均分为2组:生理盐水对照组、GnRHa 1mg·kg-1·d-1组,均连续皮下注射7d。每天行小鼠阴道脱落细胞检查,同时每天记录小鼠体重及饮食、活动、毛发等一般状况,持续至停药后10天。在用药第7天和停药后第10天,两组每次各取3只小鼠行摘眼球取血,用ELISA法测定小鼠血清FSH及E2浓度。结果:注射GnRHa后对小鼠体重及一般状况无明显影响,在1mg·kg-1·d-1剂量下,小鼠动情周期完全呈现间期表现,血清FSH及E2水平降低。在停药后小鼠重新进入动情周期,血清FSH及E2水平恢复。结论:所选GnRHa剂量为1mg·kg-1·d-1时,可产生明显的卵巢功能抑制,且该作用在停药后可逆。(三)探讨GnRHa对环磷酰胺所致的卵巢功能损伤的保护作用目的:通过GnRHa联合使用CTX,探究GnRHa是否对CTX所致的小鼠卵巢功能损伤具有保护作用。方法:选取具有正常动情周期的雌性7周龄昆明小鼠45只,随机均分为3组:A组(生理盐水对照组)、B组(CTX组)、C组(GnRHa+CTX组)。其中A、B组在第1-14天均皮下注射生理盐水,第8天起A组加生理盐水腹腔注射,B组加CTX100mg·kg-1·d-1腹腔注射连续7天。C组以GnRHa 1mg·kg-1·d-1在第1-14天连续皮下注射,在第8天起同步加用CTX 100mg·kg-1·d-1腹腔注射连续7天。每天行小鼠阴道脱落细胞检查,同时每天记录小鼠体重及饮食、活动、毛发等一般状况。停药后第10天对小鼠行摘眼球取血,用ELISA法测定小鼠血清FSH及E2浓度。并取小鼠双侧卵巢,行组织切片及HE染色,观察卵巢组织形态并计数卵泡。结果:B组(CTX组)小鼠一般状况变差,体重下降(P<0.05,与对照组比较),但停药后可恢复,小鼠动情周期紊乱,闭锁卵泡数增加(P<0.05,与A组及C组比较),血清E2水平下降而FSH水平上升(P<0.05,与A组及C组比较)。C组(GnRHa+CTX组)使用CTX后亦出现一般状况变差,体重下降(P<0.05,与对照组比较),在停药后亦逐渐恢复。但该组闭锁卵泡数较B组(CTX组)减少(P<0.05),E2水平升高而FSH降低(P<0.05,与B组比较),但较对照组闭锁卵泡数高、E2水平低而FSH水平高(P<0.05)。结论:CTX可对小鼠卵巢功能造成损害,GnRHa对由CTX造成的卵巢功能损伤有一定的保护作用。