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背景随着人类生活方式的转变,非酒精性脂肪肝病(NAFLD)成为危害人类健康的主要疾病之一,目前尚缺乏特异性的治疗药物。研究表明,NAFLD的恶化与肝脏免疫环境的紊乱有关,而iNKT细胞作为免疫调节的中心细胞,在NAFLD中的确切作用及机制仍不明确。因此,本课题旨在探究iNKT细胞对非酒精性脂肪肝病的调控作用及相关机制,为以iNKT细胞为靶点的NAFLD的免疫学防治提供新的治疗策略。方法高脂饮食(HFD)和蛋氨酸/胆碱缺陷饮食(MCD)分别喂养C57BL/6J建立NAFL和NASH模型,腹腔注射α-Galcer进行干预。同时采用免疫磁珠分选技术(MACS)分离纯化脾脏iNKT2细胞,过继输入NASH小鼠体内。通过小鼠外观、体重、血液生化指标(TG、TCH、HDL、LDL、ALT、AST)、肝脏指数、肝脏组织H&E染色观察干预效果;流式细胞术检测肝脏和外周血iNKT细胞及其亚群(iNKT1/iNKT2);Western Blot检测肝脏组织SREBP-1c,PPAR-α,NF-κB等相关蛋白表达水平,体外观察IL-4对HepG2细胞脂肪变性模型的干预效果,探究α-Galcer和过继输注iNKT2细胞调控肝脏脂代谢和炎症反应的机制。结果1.NAFL小鼠体重增加,未出现葡萄糖耐受和胰岛素抵抗,血清中TCH、HDL、LDL、ALT水平升高,肝脏指数较对照小鼠无明显改变,肝脏出现大面积的脂肪变性。α-Galcer干预对NAFL小鼠的体重、葡萄糖耐受、胰岛素抵抗和肝脏指数无明显影响,但降低血清TCH、HDL、LDL的水平,明显改善了小鼠肝脂肪变性程度;MCD诱导的NASH小鼠体重降低,未产生葡萄糖耐受和胰岛素抵抗,对胰岛素的敏感性提高,血清中TCH、TG、LDL水平降低而ALT和AST水平升高,肝脏指数增大,肝脏出现大面积的脂肪变性和大量的炎性细胞浸润。腹腔注射α-Galcer对NASH小鼠的体重、胰岛素的敏感性、血清TCH、TG、HDL、LDL水平和肝脏指数无影响,提高了NASH小鼠血清中ALT和AST水平,降低肝脂肪变性程度,但对肝脏炎性细胞浸润无明显改变。2.NAFL小鼠较对照小鼠肝脏iNKT细胞频率降低,其中以iNKT1亚群为主,腹腔注射α-GalCer导致肝脏iNKT细胞频率升高,其中主要为iNKT2细胞亚群;MCD喂养的NASH小鼠肝脏iNKT细胞频率升高,其中以iNKT1亚群为主。腹腔注射α-GalCer导致NASH小鼠肝脏iNKT细胞频率降低,iNKT2细胞频率升高,但仍以iNKT1亚群为主;NAFL小鼠外周血iNKT细胞频率较对照小鼠无变化,腹腔注射α-GalCer对NAFL小鼠外周血iNKT细胞频率无影响。NASH小鼠外周血iNKT细胞频率较对照小鼠降低,腹腔注射α-GalCer提高NASH小鼠外周血iNKT细胞频率。3.NAFL小鼠较对照小鼠肝脏SREBP-1c、PPAR-α表达上调,NF-κB蛋白磷酸化水平升高。腹腔注射α-GalCer下调肝脏SREBP-1c蛋白表达,上调PPAR-α蛋白表达,NF-κB蛋白磷酸化水平无变化;NASH小鼠较对照小鼠肝脏SREBP-1c、PPAR-α蛋白表达上调,NF-κB磷酸化水平升高,注射α-GalCer下调肝脏SREBP-1c蛋白表达,NF-κB蛋白磷酸化水平降低,而PPAR-α蛋白表达无变化。4.NASH小鼠过继输注iNKT2细胞,其体重、血生化指标、肝脏脂质沉积没有影响,而肝脏炎性细胞浸润增加。过继输注小鼠肝脏iNKT细胞频率升高,iNKT1和iNKT2亚群均升高,但仍以iNKT1亚群为主;外周血iNKT细胞频率无变化。5.油红O染色结果显示,IL-4的干预对HepG2细胞肝脏脂代谢没有明显作用。结论1.在NAFL和NASH两个阶段,腹腔注射α-GalCer激活肝iNKT2细胞,通过下调SREBP-1c蛋白的表达,上调PPAR-α蛋白的表达水平,改善肝脏脂肪变性;2.腹腔注射α-GalCer活化NASH小鼠肝脏iNKT2细胞,抑制NF-κB蛋白磷酸化,减轻了NASH肝脏的炎症反应;3.NASH病理状态下,肝脏炎性微环境可能诱导iNKT2细胞向iNKT1细胞转变,过继输注iNKT2细胞对NASH小鼠肝脏炎症反应可能有加重作用;4.IL-4可能不是影响HepG2细胞肝脏脂代谢的主要因素。