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背景和目的：大肠癌是最为常见的恶性肿瘤之一。目前对于晚期大肠癌或术后复发转移的病例，尚无有效的治疗手段。研发大肠癌高效的肿瘤疫苗，是目前的研究热点之一，现也已被视为未来提高其临床治愈率的希望所在。本课题结合表位生物学进展和临床病理学基础，提出针对大肠癌的新型CEA疫苗设计方案：以CEA HLA-A2限制性CTL表位与PADRE(非天然通用Th表位)作为CEA疫苗的融合治疗表位，以人类乳头状病毒16型晚期结构蛋白(HPV16 L1)作为CEA疫苗的蛋白载体，并以安全、高效的真核细胞表达体系——Bac to Bac杆状病毒表达系统来表达重组蛋白。在疫苗的设计上，兼顾了安全性和高效性，综合利用各组分的免疫特性，使之可能发挥协同作用，有利于打破机体对CEA的免疫耐受，激发高效、持久的CTL反应，从而为大肠癌的治疗探索新的方法。 方法：1、根据HPV16L1基因图谱和其蛋白形成病毒性颗粒的结构特性，设计含有限制性内切酶Sal Ⅰ和Not Ⅰ位点的引物，选择性从质粒114KL1p FastBac1扩增HPV16△L1片段(去除编码其C末端34个氨基酸残基的序列)，并将其连入T载体。2、采取定向克隆的方法，将HPV16△L1片段克隆到空载体pFastBac1的Sal Ⅰ和Not Ⅰ位点，构建中间质粒HPV16△L1pFastBac1，并测序验证。3、设计、合成含有限制性内切酶Not Ⅰ和Xba Ⅰ位点的编码CEA HLA-A2限制性CTL表位和通用性Th表位PADRE的可退火引物，将其克隆至中间质粒HPV16△L1pFastBac1的相应酶切位点，构建新型CEA疫苗的重组杆状病毒转移质粒，测序并酶切鉴定。4、用重组杆状病毒转移质粒转化感受态菌株DH10Bac，通过转座效应得到融合表位疫苗的重组杆状病毒表达载体。5、用脂质体介导转染Sf9细胞，并通过PCR鉴定重组杆状病毒。6、采用免疫组化染色检测45例大肠癌中HPV16壳蛋白抗原(HPV16 L1)、P53、PCNA的表达。 结果：1、对克隆的HPV16△L1片段的PCR扩增产物进行电泳，在1.6kb附近见到一特异性条带，表明HPV16△L1片段克隆成功。2、重组杆状病毒转移质粒经Sa1Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切后，得到目的片段和载体片段，测序结果符合设计序列，表明连接成功。3、提取感染重组杆状病毒的Sf9细胞DNA后，PCR证实其产物为所需序列。