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研究背景:
结肠癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一,近年来其发病率呈上升趋势。目前结肠癌的早期诊断仍然处于较低水平,多数患者诊断时已处于进展期或有远处转移。近年来肿瘤的微环境对肿瘤的影响已经成为研究热点,而肿瘤相关巨噬细胞(tumor associated macrophage,TAM)在其中的作用尤为突出。
肿瘤相关巨噬细胞位于肿瘤间质,是肿瘤相关慢性炎症中的关键细胞,它可以在肿瘤缺氧区域密集,一旦被激活,巨噬细胞就成为肿瘤微环境中的细胞因子、生长因子和蛋白酶的主要来源,肿瘤相关巨噬细胞可以通过这些细胞因子作用于肿瘤细胞,改变肿瘤的生长、增殖、侵袭和转移等生物学特性。既往研究中发现肿瘤相关巨噬细胞与乳腺癌、前列腺癌、膀胱癌密切相关,它的浸润程度与这些肿瘤患者的预后呈负相关,而对结肠癌的研究并未形成统一的定论。本研究通过建立结肠癌SW480细胞与巨噬细胞(Mφ)共培养体系并检测上清中细胞因子的变化,探讨肿瘤相关巨噬细胞对结肠癌生物学行为的影响。
研究目的
1,探讨替代激活的巨噬细胞对结肠癌SW480细胞侵袭和迁移的影响。
2,探讨替代激活的巨噬细胞对结肠癌SW480细胞侵袭和迁移影响的机制。
材料与方法:
1.材料
(1)SW480细胞购于中山大学病理学教研室
(2)主要试剂及仪器:DMEM和Leibovitzs L15培养基购自美国Gibco,FACSAsia流式细胞仪(美国BectonDickinson),PEDF ELISA试剂盒(美国Cusabio),VEGF ELISA试剂盒购自欣博盛生物科技有限公司,IL4购自美国R&D公司,LPS购自广州威佳,Wellscan MK3酶标仪(Labsystem Dragon,美国),CO2恒温培养箱(意大利JOUAN公司)。
2.方法
单纯SW480组为空白对照组,SW480与未激活的巨噬细胞为未激活组(UaMφ),SW480与20μg/ml脂多糖(LPS)激活的巨噬细胞共培养为经典激活组(CaMφ),SW480与45ng/ml白介素-4(IL-4)共培养为替代激活组(AaMφ)。流式检测共培养体系中不同激活状态下的巨噬细胞对SW480细胞增殖和凋亡的影响,侵袭实验、迁移试验、过河试验检测肿瘤相关巨噬细胞对结肠癌SW480细胞侵袭和迁移的影响,酶联免疫吸附(ELISA)方法检测transwell共培养体系上清中细胞因子VEGF、PEDF的变化。所有统计数据采用SPSS11.0统计软件完成。
结果:
(1)空白对照组、SW480+UaMφ组、SW480+CaMφ组、SW480+AaMφ组中SW480细胞凋亡率分别为4.50%±0.47%、4.67%±0.46%、4.81%±0.50%、4.86%±0.46%,差异无统计学意义。空白对照组、SW480+UaMφ组、SW480+CaMφ组、SW480+AaMφ组中SW480细胞增殖率分别为29.70%±1.29%、29.90%±1.63%、31.56%±2.53%、29.74%±2.17%,差异无统计学意义(以上P均<0.05)。
(2)空白对照组、SW480+UaMφ组、SW480+CaMφ组、SW480+AaMφ组中穿过transwell膜的细胞数量分别为162±22、110±11、103±9、32±8,SW480+UaMφ组和SW480+CaMφ组差异无统计学意义,其余任何两组比较均有统计学意义,P均<0.05,替代激活Mφ明显抑制SW480侵袭和迁移。
(3)空白对照组、SW480+UaMφ组、SW480+CaMφ组、SW480+AaMφ组VEGF的量分别为682.54±14.26pg/ml、445.5±16.47pg/ml、474.66±9.34pg/ml、61.76±17.33pg/ml,SW480+AaMφ组与空白对照组差异有统计学意义。(P<0.05)
(4)空白对照组、SW480+UaMφ组、SW480+CaMφ组、SW480+AaMφ组PEDF量分别为5095.00±930.59ng/ml、4621.50±543.51pg/ml、4584.00±544.21pg/ml、4580.93±479.85pg/ml,任何两组比较差异无统计学意义。(P>0.05)
结论:
1.替代激活的巨噬细胞能够抑制SW480结肠癌细胞的侵袭和迁移。
2.替代激活的巨噬细胞抑制结SW480肠癌细胞侵袭和迁移可能与下调VEGF的分泌有关。