Notch信号在棉铃虫蛹发育中的作用研究

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自然界中的很多生物为了保持种群的延续,经过长期的自然选择,从而进化出不同的策略来应对恶劣的生存环境,其中棉铃虫就是通过滞育的方式来度过不良环境。棉铃虫幼虫能够感知短光照和低温的不良环境信号,化蛹后进入滞育,滞育期间蛹的抗逆性增强,代谢活性下降,直到环境改善后滞育才被打破,进而继续发育完成世代生长。已有的研究表明,Notch信号能够维持线虫的Dauer状态。本研究以此为切入点,探究Notch信号通路在棉铃虫滞育中的作用。Notch蛋白表达时相表明,其在非滞育型蛹脑中具有较高的表达水平,在滞育型蛹脑中的表达水平随着滞育天数的增加而呈逐渐下降的趋势,此结果与c-Myc的蛋白表达时相一致。另外,进一步的细胞实验结果表明Notch能够调控c-Myc基因的转录和表达。ChIP实验结果表明,在棉铃虫蛹脑内c-Myc蛋白能够与TFAM基因启动子序列结合。通过过表达和Notch抑制剂LY411575处理HzAml细胞,发现Notch可以影响TFAM基因的启动子活性及其蛋白水平的表达,从而可见Notch能够通过c-Myc调控TFAM基因的转录和表达。TFAM作为线粒体转录因子,对于线粒体活性的调节具有重要作用。过表达Notch,线粒体的DNA水平上升;抑制剂处理和干扰Notch后,线粒体的DNA含量下降。另一方面由于细胞色素c氧化酶是线粒体行使能量转化功能不可缺少的复合体,因此本研究使用COX的酶活性代表线粒体整体活性,调查Notch对线粒体活性的影响。在细胞中干扰Notch,COX酶活性下降,说明Notch能够调控线粒体活性。综上所述,本研究表明Notch通过c-Myc-TFAM途径来影响棉铃虫蛹脑中的线粒体活性。非滞育型蛹脑中Notch高水平表达提高了线粒体活性,从而促进虫体发育,与之相反,滞育型蛹脑中低水平表达的Notch抑制了线粒体活性,使虫体维持在滞育状态。
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