明串珠菌是一类进行异型发酵的革兰氏阳性、耐氧的乳酸细菌,被美国FDA认定为一般安全的菌。明串珠菌能够代谢产生葡聚糖、甘露醇、双乙酰等物质,在功能性食品、乳制品等领域有广泛应用。本课题特异性失活明串珠菌ALDH基因,得到突变菌株,然后和原始菌株生理生化特性进行对照,为基因工程育种奠定了基础。　　电击转化效率直接影响同源重组的几率,本文从多个因素优化了明串珠菌电击转化的条件。结果表明,用氨苄浓度0.7μg/mL的MRS培养基培养明串珠菌细胞至OD600为0.5左右,以PBS作缓冲液,收获制成感受态细胞,与10μLDNA混合,在电场强度12KV/cm、电阻200Ω、电容25μF下电击转化,以含80mmol/LMgCl2的MRS培养基复苏培养3h,得到最高的转化效率为1.75×105CFU/μgDNA。　　同源重组载体的构建在基因失活技术中占重要地位。本文以红霉素抗性作为筛选标记,连接到载体pTA2上,构建了中间载体pTA2-ErmAM。再将ALDH基因的左右两臂分别连接到pTA2-ErmAM的左右两侧,得到了同源重组载体pTA2-ErmAM-Aldh。　　将电击转化后的菌株分别涂布于含有红霉素和氨苄青霉素的平板上,得到了只抗红霉素的菌株,再进一步扩增发生了同源重组的基因序列,得到了突变菌株LeuALDH-。然后从代谢调控方面对比原始菌株和突变菌株,结果表明,突变菌株甘露醇、双乙酰的产量都明显提高。