基于JAK/STAT通路探讨桂枝芍药知母汤对TNF-α诱导的MH7A细胞的抗炎作用

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目的:本实验研究桂枝芍药知母汤对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(MH7A cell)的细胞毒性,以及桂枝芍药知母汤能否抑制肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的MH7A细胞炎症因子的分泌,并初步探究其作用机理。方法:选择MH7A细胞系作为实验研究对象,首先采用MTT法测定桂枝芍药知母汤对MH7A细胞存活率的影响,筛选出适当的药物浓度。将MH7A细胞分为空白组、TNF-α组、低剂量药物组、中剂量药物组、高剂量药物组,除空白组外,其余各组采用TNF-α(10 ng/mL)进行刺激,各药物组根据MTT实验结果分别采用不同浓度的桂枝芍药知母汤(100μg/mL、200μg/mL、600μg/mL)进行干预,继续培养各组细胞24h。ELISA法检测各组细胞上清液中炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)的水平;Western-blot检测各组细胞中JAK2、STAT3蛋白的表达。结果:1)桂枝芍药知母汤在600μg/mL浓度以下对MH7A细胞系无明显的细胞毒性;2)桂枝芍药知母汤可以抑制TNF-α诱导的MH7A细胞系炎症细胞因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)的生成(P<0.05);3)中、高剂量桂枝芍药知母汤组JAK2蛋白表达量降低,结果无统计学意义(P>0.05);低、中、高剂量桂枝芍药知母汤组STAT3蛋白表达量均有降低趋势,结果无统计学意义(P>0.05)。结论:实验数据表明,桂枝芍药知母汤在600μg/mL浓度以下对MH7A细胞系无明显的细胞毒性,桂枝芍药知母汤可以减少TNF-α诱导的MH7A细胞中炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)的生成,其机制可能与JAK2、STAT3蛋白表达量呈下降趋势有关,但其确切的机制仍需要进一步的实验验证。
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