小菜蛾热休克蛋白基因的克隆与mRNA热激表达研究

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 5次 | 上传用户:laopengtou
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本文是在本实验室研究抗性和敏感性小菜蛾高温(37℃)条件下适合度与其体内Hsp70表达量关系的基础之上,进一步利用分子生物学的相关知识,克隆小菜蛾hsp70基因片段并以此为模板合成探针进行Northern杂交,研究抗性和敏感性小菜蛾在高温诱导下hsp70mRNA表达量之间的差异。本研究在登陆Genbank,BLAST昆虫hsp70,选取保守区域利用Primer5.0软件,设计了两对引物,PCR产物纯化后送Invitrogen公司进行TA克隆后测序,主要研究结果如下:1.在小菜的上下游区域分别克隆出一条600bp和680bp的片段,与其他昆虫进行BLAST同源性比对,同源性在83%~86%之间。2.克隆出的两个片段中间有重复区域,接拼之后获得长度为857bp小菜蛾hsp70的片段。与其他昆虫进行BLAST同源性比对,同源性在84%~86%之间。故推测此序列为小菜蛾hsp70 mRNA的序列。3.杂交结果表明:抗性和敏感性小菜蛾在常温和37℃高温热处理时hsp70均有所表达;而敏感小菜蛾在37℃高温热处理后hsp70mRNA诱导水平高于抗性小菜蛾;整体上,雌性小菜蛾hsp70mRNA诱导水平高于雄性小菜蛾。
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