由大豆疫霉菌引起的根腐病是影响世界大豆生产的毁灭性病害之一,利用抗病品种是控制该病害最经济和有效的措施。然而,由于大豆疫霉菌小种的高度变异性导致品种抗性极易丧失,挖掘持久性抗病基因已成为抗病育种的难题。因此,找到非寄主对大豆疫霉菌抗性反应的关键基因,就可能利用基因工程手段创造广谱和持久的抗性材料。本研究的目的就是寻找非寄主烟草对大豆疫霉菌信号识别和抗性反应相关的基因,为从分子水平上解释非寄主对大豆疫霉菌抗性的机理提供依据。本研究获得了以下主要结果:1.为寻找大豆疫霉激发素(Elicitin)蛋白的受体,构建了用于酵母双杂交系统的“诱饵”载体,并检测其是否具有毒性和自激活作用。通过PCR从含大豆疫霉激发素基因的TOPO质粒中扩增出目的片段,并将目的片段按正确方向插入诱饵载体PGBKT7中,重组质粒导入酵母菌株AH109,检测其表达产物对酵母细胞中的报告基因有无激活作用以及对酵母有无毒性。结果表明含激发素蛋白的诱饵载体对酵母菌株AH109的报告基因无自激活作用,且对酵母细胞无毒性。该研究为进一步从植物cDNA文库筛选寻找与激发素相互作用的受体蛋白奠定了基础。2.以普通烟草k326为材料,用SMARTTM cDNA Library Construction Kit合成烟草cDNA。提取RNA与合成产物经电泳检测表明:提取的总RNA比较完整,纯度较高。LD-PCR产物主要集中在0.5～5kb之间,符合构建文库要求。3.利用酵母双杂交技术从烟草中筛选了与类激发素PPSE7和激发素SOJB互作的蛋白。PPSE7和SOJB分别从烟草筛选出了11个和14个蛋白; PPSE7和SOJB在烟草中存在几个相似的结合蛋白,表明二者具有共享的生物功能。在烟草中,SOJB能与蛋白质降解有密切关系的两个蛋白—肽酶和泛素结合蛋白互作,而PPSE7没有筛选到类似蛋白,这与本研究中SOJB的作用相符。SOJB和PPSE7均能与跨膜运输蛋白结合,PPSE7与水通道蛋白,SOJB则与铜离子转运蛋白互作,表明二者在胞质内存在作用靶标。4.为了验证与激发素互作蛋白质的功能,利用gateway克隆技术,构建了8个目标基因的gateway兼容的RNAi表达载体,为进一步分析这些基因的功能做好了准备。