【摘 要】
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第一部分目的:构建CPEB4基因沉默及CPEB4基因过表达的NPC细胞系,检测CPEB4表达对于鼻咽癌CNE-2细胞的EMT表型的影响。方法:通过感染慢病毒构建CPEB4基因沉默及CPEB4基因过表达的CNE-2细胞系,分为四组:CPEB4过表达对照组、CPEB4过表达组、CPEB4干扰对照组、CPEB4干扰组。Western blotting检测感染病毒后每组的CPEB4、β-catenin、E
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第一部分目的:构建CPEB4基因沉默及CPEB4基因过表达的NPC细胞系,检测CPEB4表达对于鼻咽癌CNE-2细胞的EMT表型的影响。方法:通过感染慢病毒构建CPEB4基因沉默及CPEB4基因过表达的CNE-2细胞系,分为四组:CPEB4过表达对照组、CPEB4过表达组、CPEB4干扰对照组、CPEB4干扰组。Western blotting检测感染病毒后每组的CPEB4、β-catenin、E-cadherin、Vimentin的相应表达量。划痕实验检测四组细胞的在0h,24h和48h的迁移能力;四个分组的24h侵袭能力由Transwell检测。结果:Western blotting结果显示相对于CPEB4过表达对照组,CPEB4、β-catenin、Vimentin在CPEB4过表达组中表达水平升高,E-cadherin在CPEB4过表达组中表达水平降低,差异具有显著性（P<0.05）;相对于CPEB4干扰对照组,CPEB4、β-catenin、Vimentin在CPEB4干扰组中表达水平降低,E-cadherin在CPEB4干扰组中表达水平升高,差异具有显著性（P<0.05）。划痕实验结果表明相对于CPEB4过表达对照组,过表达组随着时间的推移,愈合速度更快,迁移能力更强,差异具有显著性（P<0.05）;相对于CPEB4干扰对照组,干扰组随着时间的推移,愈合速度更慢,迁移能力更差,差异具有显著性（P<0.05）。Transwell实验结果表明,相对于CPEB4过表达对照组,过表达组侵袭能力更强,差异具有显著性（P<0.05）;相对于CPEB4干扰对照组,干扰组侵袭能力更弱,差异具有显著性（P<0.05）。结论:1)CPEB4表达的改变能够使CNE-2细胞内的β-catenin的表达发生相应的改变;2)CPEB4表达的改变能够使CNE-2细胞内的EMT相关蛋白的表达（如E-cadherin、Vimentin）发生相应的改变;3)CPEB4表达的改变能够使CNE-2细胞的迁移能力和侵袭能力发生相应的改变;4)CPEB4的表达变化可能影响鼻咽癌的EMT的发生过程。第二部分目的:观察CPEB4与β-catenin在鼻咽癌细胞系CNE-2细胞中的定位,并验证CPEB4与β-catenin的结合作用。方法:（1）生物信息学分析:筛选CPEB4下游作用分子;（2）细胞免疫荧光:观察CPEB4与β-catenin在鼻咽癌细胞系CNE-2细胞中的定位;（3）RIP技术（RNA Binding protein Immunoprecipitation Assay,RNA结合蛋白免疫沉淀）:验证CPEB4与β-catenin的结合作用;结果:生物信息学结果分析显示:β-catenin可能是CPEB4的下游作用分子。细胞免疫荧光结果表明,CPEB4和β-catenin共定位于CNE-2的细胞胞质中,这表明两者可能会用作用。RIP实验结果表明CPEB4可结合β-catennin。结论:1)CPEB4与β-catenin共表达于细胞质中,这表明两者可能会用作用。2)此外,CPEB4可通过结合β-catennin对其表达起到调控作用。第三部分目的:验证CPEB4可通过调控β-catenin翻译水平诱导鼻咽癌细胞EMT的发生过程。方法:将CPEB4过表达组分别加入两种β-catenin的抑制剂作为实验组,未进行任何处理的CPEB4过表达组作为对照组。Western blotting检测三组的β-catenin、E-cadherin、Vimentin的相应表达量。划痕实验检测三组细胞的在0h,24h和48h的迁移能力;三个分组的24h侵袭能力由Transwell检测。结果:Western blotting结果显示相对于对照组,两组加药组的E-cadherin表达水平升高,β-catenin、Vimentin在两组加药组中是表达水平降低,差异具有显著性（P<0.05）。划痕实验结果表明相对于对照组,两组加药组的愈合速度更慢,迁移能力更差,差异具有显著性（P<0.05）。Transwell实验结果表明,相对于对照组,两组加药组的侵袭能力更弱,差异具有显著性（P<0.05）。结论:实验证实CPEB4可通过调控β-catenin翻译水平诱导鼻咽癌细胞EMT的发生过程。
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