染料木黄酮对体外培养的兔眼结膜成纤维细胞生长的影响

来源 :山西医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lillian0606
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目的:研究染料木黄酮(Genistein, Geni)对体外培养的兔眼结膜成纤维细胞(rabbit conjunctival fibroblasts ,RCF)增殖的影响。方法:将RCF进行体外原代和传代培养,绘制生长曲线。取第3-5代细胞做药物抑制试验:⑴将其接种于96孔板,继续培养24h后,加入不同浓度的Geni(0.3125-40μg·ml-1)、5-Fu(10-2-102μg·ml-1)以及联合组[(Geni 5μg +5-Fu 1μg)·ml-1和(Geni 10μg +5-Fu 1μg)·ml-1]作用48h后,用MTT法测定吸光度,计算细胞生长抑制率;⑵接种方法同上,加入不同浓度的Geni(0.625-40μg·ml-1)分别作用1、3、5、7天后,用MTT法测定同上;⑶细胞培养24h后加入0、5、10和20μg·ml-1的Geni,48h后用流式细胞仪检测药物对RCF细胞周期的影响;⑷采用Annexin V-/PI双标记染色法分析0、2.5和10μg·ml-1的Geni对兔结膜成纤维细胞凋亡的影响。结果:兔眼结膜成纤维细胞经染料木黄酮作用48h后,0.3125、0.625μg·ml-1对细胞的生长无明显抑制作用,而2.5-40μg·ml-1的抑制率分别为27.16%、34.02%、44.55%、55.08%、58.90%;1、10、100μg·ml-1的5-Fu的抑制率分别为41.67%、62.88%、69.81%,与对照组相比有显著性差异。不同浓度的Geni作用1、3、5、7天的细胞抑制率,随时间、剂量增加而加大。Geni(5、10μg·ml-1)与5-Fu(1μg·ml-1)联用,对细胞生长的抑制率分别为45.57%和49.09%,具有协同效应。流式细胞仪显示,RCF经5-20μg·ml-1Geni作用48h后,G2-M期细胞从6.34%增至9.37%。RCF经10μg·ml-1作用48h可诱发细胞凋亡。结论:体外培养兔眼结膜成纤维细胞的生长和DNA合成可被Geni抑制,有时间和剂量依赖性。5-Fu与Geni有协同效应。Geni影响RCF细胞周期各时相群体,将细胞阻滞于G2-M期,从而抑制细胞增殖。10μg·ml-1的Geni可引起RCF细胞凋亡。该结果可为探索使用细胞生长抑制药物,防治眼部增殖性疾病、减少青光眼手术后复发率提供理论和实验依据。
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