本课题围绕“乙醇脱氢酶(ADH)的制备工艺及酶学性质”研究了以下内容： 分别从废弃啤酒酵母和实验室培养的醋酸杆菌中制备ADH，考察了不同提取条件对ADH提取效果的影响，并对其中的主要影响因素进行了L9(33)正交分析。采用硫酸铵沉淀、透析、柱层析、SDS-PAGE对啤酒废酵母ADH进行了分离纯化。结果显示，采用超声破碎法进行酵母细胞破碎，料液比1:2、一次性处理样品量20g、提取缓冲液pH值为8.5、超声功率320W、超声全程时间10min，为ADH最佳提取工艺。粗酶液经过盐析、透析、SephadexG-75柱层析后，其纯化倍数可达2.13。经SDS-PAGE电泳后发现，纯化前后的ADH酶液与标准品有一条共同的蛋白带，即为分离纯化后所要得到的ADH亚基的蛋白带。 在醋酸杆菌ADH分离提取过程中，采用超声波破碎法对细胞进行破碎，料液比1:3、超声功率400W、超声全程时间15min、提取缓冲液pH7.0为最佳提取工艺。粗酶液经过盐析、透析、SephadexG-75柱层析后，其纯化倍数为1.92。通过SDS-PAGE电泳后，可以看到纯化前后的ADH酶液在啤酒酵母标准品稍微偏上的位置有一条共同的蛋白带，由此推测，醋酸杆菌中的ADH亚基分子量比啤酒酵母ADH的亚基小。 分别考察了啤酒废酵母中ADH和醋酸杆菌中ADH的部分酶学性质，由试验结果得知，啤酒废酵母ADH以NAD+为辅酶，催化乙醇反应的最适pH为9.0，在pH8.5～pH10之间保存较为稳定。最适反应温度为27℃，在低于25℃保温时ADH活力最高。各种金属离子对其活力影响结果为：K+有促进作用，Ag+有较强的抑制作用；二价金属离子中，Cu2+的抑制作用较明显，而Ca2+却有较强的促进作用。该酶有广泛的底物专一性，乙醇是最好的底物，对甲醇和甲醛活性很小，但辛醇和烯丙醇也是ADH极好的底物。 醋酸杆菌ADH在催化乙醇发生氧化反应时所依赖的辅酶为NAD+，pH8.0为其最适反应pH，在pH8.0到9.5之间保存时ADH活力最高。最适反应温度为45℃，在30℃之下保存时较为稳定。各种金属离子对醋酸杆菌ADH有不同的影响，K+对其有促进作用，Ag+有很强的抑制作用。二价金属离子中，Zn2+有抑制作用，Ca2+和Cu2+的抑制作用较为明显，而Mg2+有促进作用。Fe3+的抑制作用也较强。醋酸杆菌中ADH对直链含有-CH2OH基团的伯醇(如乙醇、正丙醇)结合力较强，而对于多元醇(如丙三醇)的结合力则很弱，乙醇为其最佳底物。 试验采用酸性重铬酸盐氧化法检测样品中乙醇含量的变化。以啤酒废酵母中的ADH为试验材料，分别在体内和体外进行了ADH分解乙醇的试验。ADH加入到人工胃液中，于37℃下6min左右就会失活。当人工胃液与ADH酶液的比例为1:1时，ADH失活速度就会减缓。ADH酶液在人工肠液中放置24h后，ADH活力可损失将近一半。ADH在人工肠液和人工胃液中都可引起乙醇分解，在人工肠液中其分解能力更强一些。体内试验以小鼠血液中乙醇含量的变化为指标，选用0.016mL/g的剂量作为小鼠酒醉乙醇的用量，通过ADH的防酒醉试验和解酒试验考察其在体内分解乙醇的作用。结果表明，在防酒醉试验中，与未用ADH酶液灌胃的对照组小鼠相比，ADH试验组小鼠血液乙醇浓度显著降低(差异显著，P＜0.05)；但解酒试验结果显示，ADH对已经处于酒醉状态的小鼠的解酒效果并不明显。 本项研究工作的开展，旨在对乙醇脱氢酶的开发应用起到积极的促进作用，具有一定的理论意义和实际应用价值。