丙型肝炎病毒核心蛋白核酸适体抗病毒作用机制

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丙型肝炎病毒(HCV)是引起严重慢性肝脏疾病的主要病原体,世界上约有1.8亿的感染者。由于HCV的抗体产生周期长、HCV RNA含量低等使得通过检测抗-HCV及实时荧光定量PCR检测HCV RNA的方法存在严重的局限性。此外,HCV基因型具有高度变异性和突变性,使得目前的治疗效果很不理想。加之,缺乏有效的丙肝疫苗,所以开发出一种新型检测和治疗HCV的方法在全世界范围内刻不容缓。HCV感染性病毒颗粒产生模式是核心蛋白在脂滴表面富积,参与病毒颗粒在脂滴表面或附近的组装,然后在内质网内获得包膜,进一步分泌出体外。核酸适体被称为化学抗体,与抗体相比,核酸适体因其分子小、易合成和易修改而具有显著性优势。研究发现,运用SELEX技术筛选出的针对HCV核心蛋白的核酸适体在开发药物方面具有广阔的前景。本文将HCV核心蛋白分段克隆到原核/真核表达载体,并对core分段蛋白进行了原核表达及纯化。我们的研究结果显示:core蛋白核酸适体不仅能够特异性识别原核表达的重组core蛋白,还能检测出HCV病人血清中的core蛋白。研究还发现core核酸适体不影响HCV RNA的复制及病毒的释放,但抑制感染性病毒颗粒的产生。在核酸适体处理的HCV感染系统中,核酸适体没有诱导干扰素及干扰素刺激因子(ISGs)的产生,细胞外ELONA实验证实了核酸适体能够与HCV core蛋白D1和D2相互作用,在细胞内转入真核重组质粒D1及D1-D2后发现病毒的感染效果有了明显的逆转,这些结果表明抗病毒作用的产生是因为核酸适体影响了core蛋白的D1与D2区的生理学功能所致。进一步实验数据显示,这些核酸适体破坏了core蛋白与脂滴表面的共定位,影响了core蛋白与NS5A蛋白的相互作用,扰乱了core蛋白与病毒基因组RNA的结合。综上所述,core核酸适体是通过影响core蛋白的生理学功能来影响HCV病毒的组装,进而达到抑制感染性病毒产生的目的。总之,我们为研究core蛋白在病毒生活周期中的作用提供了新的实验工具,为开发早期的HCV诊断试剂及开发新一代抗病毒药物提供参考。
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