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目的:采用16S rDNA高通量测序技术研究和胃安神针法对脾胃不和型失眠患者的肠道菌群结构和多样性的影响,探索和胃安神针法治疗脾胃不和型失眠的作用机制。方法:1.24例脾胃不和型失眠患者被随机分为治疗组和对照组,每组12例;治疗组接受和胃安神针法治疗,对照组接受假针刺治疗,连续4周每周5次,共计20次。另招募10例健康志愿者作为健康组。2.采用匹兹堡睡眠质量指数(Pittsburgh Sleep Quality Index,PSQI)、胃肠道症状评定量表(Gastrointestinal Symptom Rating Scale,GSRS)、焦虑自评量表(Self-rating Anxiety Scale,SAS)、抑郁自评量表(Self-rating Depression Scale,SDS)和状态-特质焦虑问卷(State-Trait Anxiety Inventory,STAI)对比分析临床症状的差异;采用16S rDNA高通量测序技术对比分析肠道菌群结构和多样性的差异;采用高效液相色谱-质谱联用技术对比分析肠道菌群代谢物?-氨基丁酸(?-aminobutyric acid,GABA)和谷氨酸(Glutamic acid,Glu)含量的差异。治疗组和对照组在入组时和治疗结束后采集上述观察指标和粪便样本,健康组仅于入组时采集粪便样本。结果:1.共有33例受试者完成本研究:健康组10例;失眠组23例,其中治疗组12例,对照组11例。2.临床症状比较:治疗组较对照组在PSQI总分和GSRS总分方面有显著改善(P<0.05);两组在SAS标准分、SDS标准分、S-AI总分和T-AI总分方面差异无统计学意义(P(29)0.05)。3.肠道菌群比较:(1)健康组与失眠组比较:失眠组梭杆菌门相对丰度显著低于健康组(P<0.05)。LEfSe分析(LDA阈值为2)显示,与失眠组相比,健康组的粪便样本中,乙型变形菌纲、伯克霍尔德氏菌目、产碱杆菌科、气单胞菌科、假单胞菌科、萨特菌属、气单孢菌属和铜绿色假单胞菌属显著富集。(2)对照组与治疗组比较:治疗前,治疗组的软壁菌门相对丰度显著低于对照组(P<0.05)且Observed OTU和Faith’s PD指数显著低于对照组(P<0.01);治疗后,两组间在物种组成与Alpha多样性指数方面差异无统计学意义(P>0.05)。治疗组经治疗后瘤胃球菌属相对丰度和Faith’s PD指数显著增加(P<0.05);对照组治疗前后在物种组成与Alpha多样性指数方面差异无统计学意义(P>0.05)。(3)肠道菌群与临床疗效关联统计分析:SMB53、布劳特氏菌属和瘤胃球菌属与PSQI总得分呈正相关;Paraprevotella、脱硫弧菌属、普拉梭菌、丛毛单胞菌属和嗜血杆菌与PSQI总得分呈负相关。SMB53与GSRS总得分呈正相关;萨特菌、铜绿色假单胞菌和普拉梭菌与GSRS总得分呈负相关。4.GABA和Glu浓度比较:失眠组的Glu浓度显著高于健康组(P<0.05)。治疗组与对照组无论在组间或是组内治疗前后比较GABA和Glu浓度差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1.和胃安神针法可提高脾胃不和型失眠患者的睡眠质量,并可改善其胃肠道症状。2.脾胃不和型失眠患者肠道菌群结构性紊乱,随着肠道菌群的改变,代谢产物Glu含量较健康组显著升高。3.和胃安神针法提高睡眠质量的作用机制,可能与提高肠道菌群多样性相关,与代谢产物Glu和GABA无明显相关性。