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目的：通过临床研究评价“藤菔降压片”的临床应用有效性和安全性，并检测分析高血压患者外周循环内皮祖细胞(endothelial progenitor cells, EPCs)的数量，基于临床研究结果，进行相应的体外研究以揭示“藤菔降压片”拮抗EPCs损伤的内在作用机制和作用靶点。
方法：一、临床研究
1、采用随机、单盲、安慰剂平行对照的临床研究，根据纳入和排除标准选择90例高血压(1级)肝阳上亢证患者，并随机分为试验药物组和安慰剂组(各45例)，分别给予藤菔降压片和安慰剂治疗4周。在试验前后分别记录受试者的中医证候积分、血压和血管内皮功能相关指标(NO、ET-1)以进行疗效评价，进行血液生化检测、心电图检测以及记录不良反应事件等以评价其安全性。
2、临床试验前后各采集一次受试者的外周血，并用流式细胞仪测定CD133、CD34、KDR的表达进行EPCs检测，以探讨“藤菔降压片”对高血压患者EPCs的干预效应。此外，还招募30名健康志愿者并采集外周血进行EPCs检测以作为高血压肝阳上亢证治疗前的对照组进行EPCs数据分析。
二、实验研究
1、首先进行大鼠骨髓源EPCs的原代培养和鉴定，并以血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)模拟高血压患者体内的主要损伤因素，探讨其对EPCs凋亡及黏附、迁移和管型分化等细胞功能的干预效应；通过加入自噬激活剂或抑制剂以上调或下调自噬水平，探讨细胞自噬在AngⅡ诱导的EPCs损伤中的作用。
2、根据前期高通量测序结果，验证lncRNA-p21在AngⅡ诱导的EPCs损伤中的表达。通过病毒转染对lncRNA-p21进行过表达或敲减，然后检测EPCs的细胞功能变化和细胞自噬水平，初步验证lncRNA-p21是否能够调控细胞自噬，并从lncRNA的视角探讨AngⅡ诱导EPCs损伤的机制以及细胞自噬的调控机制。
3、基于临床研究和上述实验研究，我们检测“藤菔降压片”的主要有效组分—“钩-莱组分”对lncRNA-p21表达的影响；过表达或敲减lncRNA-p21后，检测“钩-莱组分”干预后EPCs细胞功能变化、细胞自噬水平以及p53、AMPK、TSC2、mTOR和Atg13等相关自噬调控靶点的变化，揭示“钩-莱组分”通过调控lncRNA-p21参与细胞自噬调节的内在机制和靶点，并以此阐释其拮抗EPCs损伤的效应机制。
结果：一、临床研究：
1、相比于安慰剂组，“藤菔降压片”明显降低了受试者的血压，改善其临床症状，并且上调了血清中NO的含量，降低了血清ET-1的浓度，具有较好的降压效率和血管内皮保护作用；不良事件发生较少，临床应用安全性较好。
2、高血压肝阳上亢证患者外周血中EPCs的数量明显少于正常人群，并且晚期EPCs的比例较高。“藤菔降压片”能够提高高血压患者外周血中EPCs的数量，并使早期EPCs数量明显增多，有利于提高EPCs对高血压血管内皮损伤的修复。
二、实验研究
1、原代培养了大鼠骨髓源EPCs，体外培养14天后，Dil-acLDL/FITC-UEA-1双染和细胞标记蛋白流式鉴定结果表明EPCs约达80%。实验发现，AngⅡ能降低EPCs的细胞自噬水平，并导致其凋亡以及黏附、迁移和体外成管等细胞功能障碍；而自噬激活剂Rap通过上调自噬能够降低EPCs的凋亡、改善EPCs细胞功能；自噬抑制剂3-MA能够抑制自噬，并加重AngⅡ对EPCs的损伤效应。
2、研究证实，AngⅡ干预后能够明显降低EPCs中lncRNA-p21的表达，过表达lncRNA-p21能够明显提高细胞自噬水平，并拮抗AngⅡ诱导的EPCs损伤和细胞功能障碍；敲减lncRNA-p21能够抑制细胞自噬的发生，并加重AngⅡ的损伤效应，降低EPCs的黏附、迁移和管型分化等功能。
3、实验表明，“钩-莱组分”能够修复AngⅡ诱导的EPCs的黏附、迁移和管型分化等细胞功能损伤。进一步的机制研究发现，“钩-莱组分”通过上调lncRNA-p21而促进p53对下游靶点的转录活性，进而提高AMPK的磷酸化，上调TSC2的表达，抑制mTOR磷酸化和激活，上调Atg13表达和细胞自噬水平以拮抗EPCs功能损伤。
结论：“藤菔降压片”具有较好的临床有效性和安全性，并能够拮抗高血压患者EPCs损伤；体外实验表明，“钩-莱组分”通过上调lncRNA-p21而促进p53的转录活性，进而上调细胞自噬水平以拮抗AngⅡ诱导的EPCs功能损伤。
方法：一、临床研究
1、采用随机、单盲、安慰剂平行对照的临床研究，根据纳入和排除标准选择90例高血压(1级)肝阳上亢证患者，并随机分为试验药物组和安慰剂组(各45例)，分别给予藤菔降压片和安慰剂治疗4周。在试验前后分别记录受试者的中医证候积分、血压和血管内皮功能相关指标(NO、ET-1)以进行疗效评价，进行血液生化检测、心电图检测以及记录不良反应事件等以评价其安全性。
2、临床试验前后各采集一次受试者的外周血，并用流式细胞仪测定CD133、CD34、KDR的表达进行EPCs检测，以探讨“藤菔降压片”对高血压患者EPCs的干预效应。此外，还招募30名健康志愿者并采集外周血进行EPCs检测以作为高血压肝阳上亢证治疗前的对照组进行EPCs数据分析。
二、实验研究
1、首先进行大鼠骨髓源EPCs的原代培养和鉴定，并以血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)模拟高血压患者体内的主要损伤因素，探讨其对EPCs凋亡及黏附、迁移和管型分化等细胞功能的干预效应；通过加入自噬激活剂或抑制剂以上调或下调自噬水平，探讨细胞自噬在AngⅡ诱导的EPCs损伤中的作用。
2、根据前期高通量测序结果，验证lncRNA-p21在AngⅡ诱导的EPCs损伤中的表达。通过病毒转染对lncRNA-p21进行过表达或敲减，然后检测EPCs的细胞功能变化和细胞自噬水平，初步验证lncRNA-p21是否能够调控细胞自噬，并从lncRNA的视角探讨AngⅡ诱导EPCs损伤的机制以及细胞自噬的调控机制。
3、基于临床研究和上述实验研究，我们检测“藤菔降压片”的主要有效组分—“钩-莱组分”对lncRNA-p21表达的影响；过表达或敲减lncRNA-p21后，检测“钩-莱组分”干预后EPCs细胞功能变化、细胞自噬水平以及p53、AMPK、TSC2、mTOR和Atg13等相关自噬调控靶点的变化，揭示“钩-莱组分”通过调控lncRNA-p21参与细胞自噬调节的内在机制和靶点，并以此阐释其拮抗EPCs损伤的效应机制。
结果：一、临床研究：
1、相比于安慰剂组，“藤菔降压片”明显降低了受试者的血压，改善其临床症状，并且上调了血清中NO的含量，降低了血清ET-1的浓度，具有较好的降压效率和血管内皮保护作用；不良事件发生较少，临床应用安全性较好。
2、高血压肝阳上亢证患者外周血中EPCs的数量明显少于正常人群，并且晚期EPCs的比例较高。“藤菔降压片”能够提高高血压患者外周血中EPCs的数量，并使早期EPCs数量明显增多，有利于提高EPCs对高血压血管内皮损伤的修复。
二、实验研究
1、原代培养了大鼠骨髓源EPCs，体外培养14天后，Dil-acLDL/FITC-UEA-1双染和细胞标记蛋白流式鉴定结果表明EPCs约达80%。实验发现，AngⅡ能降低EPCs的细胞自噬水平，并导致其凋亡以及黏附、迁移和体外成管等细胞功能障碍；而自噬激活剂Rap通过上调自噬能够降低EPCs的凋亡、改善EPCs细胞功能；自噬抑制剂3-MA能够抑制自噬，并加重AngⅡ对EPCs的损伤效应。
2、研究证实，AngⅡ干预后能够明显降低EPCs中lncRNA-p21的表达，过表达lncRNA-p21能够明显提高细胞自噬水平，并拮抗AngⅡ诱导的EPCs损伤和细胞功能障碍；敲减lncRNA-p21能够抑制细胞自噬的发生，并加重AngⅡ的损伤效应，降低EPCs的黏附、迁移和管型分化等功能。
3、实验表明，“钩-莱组分”能够修复AngⅡ诱导的EPCs的黏附、迁移和管型分化等细胞功能损伤。进一步的机制研究发现，“钩-莱组分”通过上调lncRNA-p21而促进p53对下游靶点的转录活性，进而提高AMPK的磷酸化，上调TSC2的表达，抑制mTOR磷酸化和激活，上调Atg13表达和细胞自噬水平以拮抗EPCs功能损伤。
结论：“藤菔降压片”具有较好的临床有效性和安全性，并能够拮抗高血压患者EPCs损伤；体外实验表明，“钩-莱组分”通过上调lncRNA-p21而促进p53的转录活性，进而上调细胞自噬水平以拮抗AngⅡ诱导的EPCs功能损伤。