【摘 要】
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土壤微生物天然产物是发现新型抗生素的重要来源。本文从不同来源的土壤环境中分离菌株,通过对抑菌活性的筛选,得到一株具有良好抑菌活性的H6菌株。同时对该菌株进行了菌种鉴
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土壤微生物天然产物是发现新型抗生素的重要来源。本文从不同来源的土壤环境中分离菌株,通过对抑菌活性的筛选,得到一株具有良好抑菌活性的H6菌株。同时对该菌株进行了菌种鉴定、培养条件的探索、对其代谢天然产物进行了分离纯化和结构鉴定,最后对分离得到的天然产物进行了抑菌活性验证和抗肿瘤活性分析。1.H6菌株的分离与鉴定:将分离得到的56株菌株对白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、维氏气单胞菌、欧文氏菌、嗜水气单胞菌等菌株进行抑菌活性筛选。经过初次筛选,发现4株菌的代谢产物具有较好的抑菌效果。H6菌株是活性最为明显的一株。同时对菌株的代谢产物进行了 HPLC分析,发现其中2株代谢产物与H6菌株相同,另一株代谢产物较少,因此将H6菌株作为重点研究。通过对H6菌株形态观察、培养特征、生理生化特征以及16S rRNA基因序列分析鉴定,确定H6菌株为无色杆菌属。2.H6菌株培养条件的探索和代谢产物的理化性质的分析:通过对培养条件的初步优化,确定发酵的天数为5天,pH7.0。对代谢产物的理化性质分析结果表明:代谢产物对热稳定,用2-丁酮的萃取效果最好,在各种有机溶剂中都有一定的溶解性。3.H6菌株抑菌活性物质的分离纯化及鉴定:通过离心、溶剂萃取、旋转蒸干、分析色谱和制备色谱等方法,从10L无色杆菌H6发酵液上清中分离提纯出5个化合物。运用MS和NMR对化合物结构进行了分析。得到其中2个活性化合物的结构化合物A为吩嗪-1-甲酰胺,化合物B为吩嗪-1-羧酸,其他化合物结构正在解析中。4.将化合物A、B作用于小鼠黑色素瘤细胞B16中发现,2个化合物都能使B16细胞形态发生变化,化合物B的作用效果更明显。吩嗪-1-甲酰胺,吩嗪-1-羧酸均为吩嗪类化合物,不仅具有抑菌活性,同时还具有抗肿瘤活性。
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