禽流感作为一种重要的人畜共患病受到人们广泛关注。其病原禽流感病毒可以伴随候鸟的迁徙,在沿途进行的广泛传播,致使病情肆虐全球,造成巨大损失。H7N9、H5N1等高致病性禽流感病毒还能够感染人类,对人类生命安全造成威胁。禽流感病毒亚型较多,变异性较高,使因此针对其开展监控、检测、疫苗研发和疾病防治变得十分困难。目前常规的禽流感检测方法可能存在局限性,基于PCR方法的核酸检测依赖于取样部位,常规ELISA检测一个反应一次只能针对一种已知病毒进行检测,很难实现多种类,大范围检测,因此亟需建立一种取样简单、高通量、高特异性的禽流感病毒检测方法。本文建立了一种基于噬菌体展示的抗体谱扫描禽流感病毒检测技术。该方法首次综合运用噬菌体展示技术、免疫沉淀和高通量测序分析等先进技术手段来分析检测禽流感病毒。我们利用T7噬菌体的特性构建T7噬菌体展示禽流感病毒抗原基因片段文库,通过免疫沉淀分离与样品中的抗体结合的噬菌体,捕获下来的噬菌体经DNA提取后,高通量测序T7噬菌体内含的序列,进而分析T7噬菌体内含的禽流感病毒片段对应亚型,实现检测禽流感病毒的目的。基于噬菌体展示的抗体谱扫描禽流感病毒检测技术具有灵敏度高、特异性强、覆盖范围广等特点,在病毒含量很低或已清除的情况下进行检测,不受感染时间和抗病毒治疗干扰,一次可以检测所有亚型的禽流感病毒。应用该方法可以实现对家禽、野鸟的大批量检测,根据他们的感染情况,进行早期预警,并及时采取预防控制措施,从而从传播途径上阻断禽流感病毒的传播,进而降低禽畜患病风险,减少经济损失。通过Gene Bank查找禽流感病毒抗原片段,通过截短、简并、修饰后进行合成,经PCR扩增,将插入DNA片段与载体DNA同时进行EcoR I、Xho I双酶切、T4连接酶连接后经体外包装,构建T7噬菌体展示禽流感病毒抗原基因片段文库。经鉴定,构建的T7噬菌体展示文库库容为8×10⁹pfu,文库滴度为4×10⁸pfu mL^-1,随机挑取的100个噬菌斑均为有效重组,所展示多肽也具有与相应抗体结合的能力。通过实际检测哨兵动物血清样品,来自湖北网湖的哨兵动物绿头鸭血清中含有H5N6亚型禽流感病毒抗体,证明该地区的绿头鸭曾感染过禽流感病毒H5N6亚型。