前言结肠癌是在我国发病率及病死率较高消化系统恶性肿瘤,近年来,城市人口结肠癌发病率比10年前上升1/3,农村上升9%。早期诊断率只有11%-15%,80%以上患者确诊时已属中晚期,如能早期发现、治疗,术后5年生存率可达90%以上,而晚期结肠癌五年生存率低于20%。尽管结肠癌的治疗方法不断改进,但是仍然不能达到满意的效果,大多数的病人由于局部复发和转移扩散在短时间内死亡。结肠癌之所以预后不良主要是因为在疾病发展过程中入侵周围的组织结构并扩散到远处器官,目前,结肠癌的生物学特点仍不能完全了解。结肠癌的发生是一个多基因参与、多阶段发展的复杂过程,是环境因素与基因交互作用的结果。各种致癌因素引起细胞内多种基因的变化,从而在细胞粘附、信号传导、血管发生等多方面促进了肿瘤的发生和演进。研究结肠癌的治疗具有重要的临床意义,中药在恶性肿瘤治疗中发挥着不可忽视的作用,槐耳清膏是槐栓菌质发酵后的热水提取物,其味苦辛,性平无毒,具有“治风”、“破血”、“益力”之功效,近来发现它能抑制实体肿瘤的血管生成。有研究证明金克槐耳能诱导直肠癌细胞凋亡,但其作用机制尚不明确。早在1971年Folkman首次提出“肿瘤的生长和转移依赖于新生血管形成”的观点,血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)是促进血管形成,增强血管内皮细胞增殖和迁移能力的重要介质。虽然抑制肿瘤血管新生早已成为当前抗肿瘤治疗热点之一,但金克槐耳是否具有抗结肠癌新生血管生成的作用尚未见文献报道。本研究以人结肠癌SW480细胞株为对象,研究缺氧条件下槐耳清膏对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)及其调节基因缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的抑制作用,初步探讨槐耳清膏在抑制肿瘤新生血管形成方面的作用机制,为结肠癌临床治疗提供新的理论和实验依据。方法1、细胞培养2、MTT法3、RT-PCR法4、Western Blot法本实验先进行MTT法,之后体外培养人结肠癌SW480细胞48 h,随机分为常氧对照组(NC组)、低氧对照组(HC组)和低氧槐耳组(HH组),HH组RPMI1640培养基含槐耳清膏,分别进行RT-PCR法和Western Blot法。结果1、槐耳清膏对SW480细胞抑制率随药物浓度增加而上升,1mg/ml时抑制率最大(66.53%),与5-FU组(浓度为10μg/ml)相比无统计学意义。2、HH组和HC组VEGF、HIF-1αmRNA表达水平均显著高于NC组(VEGF mRNA:4.71±0.07,4.54±0.02 vs.1.19±0.03, HIF-1αmRNA:5.68±0.07,5.58±0.05 vs.1.21±0.05,均P<0.05),但HH组与HC组比较无统计学差异(P>0.05)。3、HC组VEGF, HIF-1α蛋白表达均显著高于NC组(VEGF蛋白：0.66±0.03vs.0.38±0.02, HIF-1α蛋白:0.58±0.04 vs.0.31±0.03,均P<0.05), HH组较HC组VEGF和HIF-1α蛋白表达均显著下降(VEGF蛋白：0.37±0.03 vs.0.66±0.03,HIF-1α蛋白：0.30±0.05 vs.0.58±0.04,均P<0.05)。结论1、槐耳清膏可抑制SW480细胞生长,1mg/ml时抑制率最大。2、机制为槐耳清膏通过下调人结肠癌SW480细胞内HIF-1α和VEGF蛋白表达抑制肿瘤。