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实验目的：研究PPARγ激动剂和全反式维甲酸对间充质干细胞骨向分化的影响及可能机制。实验方法：采用化学发光法、PCR、Western blot、报告质粒等技术,研究PPARγ受体激动剂曲格列酮与全反式维甲酸对间充质干细胞骨向分化的影响。具体方法如下：1.检测单独及联合使用曲格列酮(Tro)和/或全反式维甲酸(ATRA)后,早期成骨指标碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)的活性变化。2.检测单独及联合使用Tro和/或ATRA后,矿化基质沉积的变化。3.从基因表达水平和蛋白质表达水平检测单独及联合使用Tro和/或ATRA后,MEFs细胞成骨晚期指标骨桥素(osteopontin, OPN),骨钙素(osteocalcin, OC)的表达情况。4.利用重组腺病毒技术,过表达及干扰PPARy2基因,检测Tro和/或ATRA对MEFs细胞碱性磷酸酶活性的影响。5.利用报告质粒及Western blot,检测使用Tro和/或ATRA对BMPR-Smad信号通路转录活性的影响。6.利用Oil-red染色及Western blot,检测Tro和/或ATRA对MEFs细胞成脂分化的影响。实验结果：1.Tro和ATRA联合应用增强MEFs细胞ALP活性。2.Tro和ATRA联合应用增强MEFs细胞矿化基质沉积。3.Tro和ATRA联合应用增加MEFs细胞OPN及OC的表达。4.过表达PPAR/2基因,可以增强Tro和ATRA联合诱导的MEFs细胞ALP活性。5.Tro和ATRA联合应用能激活BMPR-Smad信号通路。6.Tro和ATRA联合应用能抑制Tro诱导MEFs细胞成脂分化。实验结论：Tro与ATRA联合应用能明显诱导MEFs细胞成骨分化。这种作用可能与增强BMPR-Smad信号转录活性及抑制MEFs细胞成脂分化有关,具体机制有待进一步研究。