鸡心包积液-肝炎综合征(HHS)是由I群禽腺病毒(Fowl adenovirus I,FAV-I)血清4型引起的一种传染病。本病典型症状为心包积水、坏死性肝炎,主要以3~6周龄肉仔鸡最易感,死亡率高达80%。在印度、加拿大、日本、俄罗斯等许多国家均有报道该病的发生。近几年,在我国江苏、河南、山东和福建等地陆续在817、三黄鸡及地方品种的青年鸡群,发生了这种流行病。由于I群禽腺病毒作为原发性病原的作用至今仍不清楚,因此免疫途径也一直未能确定。鸡群在感染病毒后,会造成鸡体全身免疫功能下降,使用疫苗后达不到免疫效果,给我国养禽业发展带来严重的影响。本课题利用PCR方法从湖北省养禽地区送检的病料中检测禽腺病毒,进行病毒分离和hexon基因测序,了解湖北地区I群禽腺病毒血清型的分布和感染状况。为进一步认识湖北地区分离毒株的病原特性,选择一株血清4型分离毒株进行人工感染试验,通过免疫组化方法检测FAV-I,了解湖北地区禽腺病毒在鸡体内的分布规律。取得的主要结果如下:1.湖北地区I群禽腺病毒的分离鉴定从湖北省养禽地区送检的12份心包积水-肝炎综合征发病鸡中,利用PCR方法扩增出hexon基因,经序列比对,12株分离株与Genbank中I群禽腺病毒12个不同血清型序列之间核苷酸同源性为31.1%~98.3%,与血清4型和血清10型的禽腺病毒同源性最接近,与血清4型的同源性最高达到98.1%~98.3%。遗传进化树分析显示与I群禽腺病毒血清4型均在同一分支上,说明12株分离株属于I群禽腺病毒血清4型。病料上清接种鸡胚肝细胞(CEL),发现细胞收缩变圆,细胞膜萎缩,界限模糊不清,折光性增强。出现的细胞病变与I群禽腺病毒在细胞上的病变过程一致。并测定得到12株分离毒株的TCID50分别在104.75-107.5之间。2.FAVI/HBtuanfeng/151023分离株的致病性研究本研究选择血清4型FAVI/HBtuanfeng/151023分离株人工感染33日龄的尼克白羽蛋鸡。将试验分为3组:肌注组、口服组和对照组,同时肌注组和口服组每组放10只不接种鸡为同居。肌注组通过皮下注射,口服组通过口服途径接种0.2mL?(0.2×107.5TCID50)羽的病毒液,对照组接种0.2mL?羽灭菌生理盐水,每日观察记录鸡只发病情况。感染后第3d、5d、7d对试验组和对照组的鸡进行剖杀,采集组织器官,制作病理切片。结果表明该分离毒株具有较强的致病性,感染率为100%,能引起鸡精神沉郁、食欲减退、羽毛松乱、嗜睡等症状。剖检发病鸡可见胸腔内有明显的心包积液,肝脏表面布满了大大小小的出血斑点,边缘有白色的坏死,肺水肿充血。组织病理学变化可见肝组织内有淤血,细胞核浓缩,肝脂肪变性坏死,肝细胞核内见形状不规则的核内包涵体。3.利用免疫组化方法检测FAV-I通过蔗糖浓缩方法将FAVI/HBtuanfeng/151023分离毒株进行浓缩,经甲醛灭活后免疫家兔,制备FAV-I参考毒株高免血清,琼扩抗体效价高达1:64。应用免疫组化技术对人工感染鸡不同分组的组织器官进行检测,结果表明:不同试验组的鸡感染后第3d,肝脏、心脏、肾脏、脾脏、胸腺、十二指肠中都检测到阳性信号,FAV-I侵害鸡的器官为肝脏、脾脏、肾脏和肠道。随着时间的推移,检测到靶器官阳性信号逐渐增强,免疫器官的阳性信号则呈现出强弱交替的情况。综上所述:本研究从湖北养禽地分离到的12株分离株属于I群禽腺病毒血清4型。选取FAVI/HBtuanfeng/151023株经口服、肌肉注射途径感染试验鸡均可导致发病后死亡,具有较强的致病性。利用免疫组化方法检测FAV-I,结果表明肝脏、脾脏、肾脏和肠道是禽腺病毒主要侵害的靶器官。该方法具有良好的特异性,可用于FAV-I感染鸡组织的亚细胞定位与FAV-I感染死亡鸡的诊断,为阐明FAV-I的致病机理提供有用的科学数据。