背景与目的结直肠癌（colorectal cancer CRC)是最常见的恶性肿瘤之一，它的发生是多个基因、多方面因素参与的复杂过程，其中错配修复功能缺陷引起微卫星不稳定（microsatellite instability MSI)是发生的一个重要机制。MSI是错配修复（mismatch re/Mr，丽R)基因功能缺陷性结直肠癌的一种分子表型。MSI结直肠癌包括绝大多数遗传性非息肉病性结直肠癌（hereditarynon-polyposis colorectal cancer, HNPCC)和15%散发性结直肠癌。大量研究证实，MSI是初筛HNPCC有效方法之一，MSI多提示预后良好、对5-氟尿嘧啶为主的化疗不敏感。因此在临床上通过病理特征等区分MSI结直肠癌有重要意义。MSI结直肠癌有独特临床病理特征，但在黏液腺癌和淋巴结转移方面国内报道较少。大量实验表明MSI是预后良好的标志，但提示结直肠癌对5-氟尿嘧啶不敏感，不推荐5-FU为基础的化疗，而部分研究表明MSI肠癌能从5-FU联用奥沙利钼的F0LF0X化疗中获益，而临床上结肠癌术后多采用F0LF0X化疗，因此了解F0LF0X化疗方案中MSI与MSS肠癌生存预后可为临床治疗提供帮助。除此之外，MSI结直肠癌发生机制也是目前研究热点之一，文献报道结直肠癌MSI的发生机制主要有丽R种系（主要有hMLHl、hMSH2、hMSH6、h/MS2等）突变、MLH1基因启动子甲基化，这两种发生机制并不代表全部，还存在其它发生机制。近年来，国外有研究报道，MGMT基因甲基化是MSI发生的另一种机制，而国内外也有许多文献认为两者无关联，存在争议。本研究旨在探讨MSI结直肠癌的临床病理特征、生存预后及分子机制，从分子及临床角度探索MSI发生的原因及意义，该研究将促进MSI结直肠癌的认识，为病人化疗及病人预后提供判别指标。1、以2006年6月-2011年6月在北京军区总医院消化内镜中心接诊进行微卫星检测并手术治疗的366例结直肠癌患者为对象，利用免疫荧光/CR技术，对美国国立肿瘤研究所mCI)推荐的一组5个标准化微卫星位点（BAT25、BAT26、D2S123、D5S346、D17S250)进行检测并通过GeneMa/%r软件分析判断微卫星的状态2、通过微卫星检测后，经其分为两类-：MSIH结直肠癌和非MSI-H结直肠癌(包括MSI-L和非MSI-H结直肠癌），收集术后病理信息，进行统计，通过卡方检验比较MSI-H结直肠癌与非MSI-H结直肠癌的临床病理学特征。3、对MSI-H结直肠癌及非MSI-H结直肠癌进行术后的随访，统计存活时间，利用Fisher检验分析比较两组结直肠癌的生存率。4、收集到其中所有MSI-H结直肠癌及部分非MSI-H结直肠癌蜡块组织。用免疫组化方法检测三个错配修复基因MLH1、MSH2、MSH6蛋白的表达情况，并比较免疫组化与MSI检测的吻合程度。5、使用酚氯仿方法从蜡块组织中提取DNA，用MS_ML/?VME-011试剂盒进行MLH1、MGMT甲基化检测。分析MLH1、MGMT启动子甲基化与结直肠癌关系。结果1、366例结直肠癌中，男性198例，女性168例，右半结肠52例，左半结肠94例，直肠229例，其中多原发癌9例。MSI-H为14%(51/366)，非MSI-H为86%(315/366)。MSI-H好发于右半结肠(片0.000)、多原发癌特征(片0.000)、倾向于低分化及黏液腺癌（片0.042、片0.01)及较少淋巴结转移（片0.005)的病理特征。2、58例采用FOLFOX化疗方案患者，II期MSI-H9例，三年存活8例88.9%)，死亡1例CI.1%) II期非MSI-H15例，三年存活12例60%)3例死亡(20%)；III期MSI-H11例，三年存活9例(81.8%)，2例死亡(18.2%)； III期非MSI-H23例，三年存活8例（34.8%)，15例死亡（65.2%)。统计分析得出II期结直肠癌中MSI-H患者于非MSI-H患者生存率无明显差异片0.125，III期结直肠癌中MSI-H患者生存率明显高于非MSI-H患者片0.006。3、免疫组化检测三个错配修复蛋白表达情况，其中一个错配修复基因蛋白失表达即认为表达缺失，MSI-H结直肠癌中表达缺失为43/51(84.3%)，表达良好为8/51(15.7%)。非MSI-H结直肠癌中表达缺失为2/60(3%)，表达良好为56/60(93.3%)。将MSI与免疫组化两种方法结果进行分析，结果Kappa=0.83，K0.01，表明两种方法有很好的吻合度。4、108例结直肠癌患者中（50例MSI-H，58例非MSI-H)，22例发生MLH1/3动子甲基化，其中MSI-H为20/50(40%),非MSI-H结直肠癌中2/58(3.5%)。55例发生06-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)甲基化，其中MSI-H结直肠癌中31/50(62%),非MSI-H结直肠癌中24/58(41.4%)。MLH1甲基化与MSI-H密切相关（K0.01)，MGMT甲基化在MSI-H肠癌中较非MSI-H肠癌中频繁(片0.03)。5、MLH1/3动子甲基化结直肠癌与MSI-H结直肠癌病理特征相似，好发右半结肠、倾向于低分化及黏液腺癌（片0.004，片0.000)。MGMT发生甲基化的结直肠癌好发于远端结肠（片0.045)，无其它明显的临床病理特征。结论1、MSI-H构成了一个病理学特异的结直肠癌类型。有其独特的病理学特征:好发右半结肠、倾向于低分化及黏液腺癌、较少淋巴结转移。在III期FOLFOX化疗的结肠癌中MSI-H是预后生存较好的一个标志，提示在MSI-H对FOLFOX化疗药物敏感的一种预测。2、MSI检测与免疫组化检测错配修复蛋白缺失两种方法有很好的符合度。MLH1/3动子甲基化引起的MLH1表达缺失是引起MSI-H结直肠癌的重要原因之一。MLH1甲基化结直肠癌的病理特征与MSI-H结直肠癌相似。3、MGMT甲基化结直肠癌好发远端结肠，可能是MSI-H结直肠癌发生的与MLH1/3动子甲基化平行的一个机制。