FZD6在食管鳞癌中的功能研究

来源 :华北理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liqiusheng2009
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目的1探究Frizzled6(FZD6)在食管鳞癌中的表达特异性。2探究FZD6对食管鳞癌的迁移、侵袭、增殖、克隆等表型的影响。3探究FZD6与转录因子TP63、SOX2是否相关。方法根据公共数据库进行分析,与正常组织相比,FZD6在多种肿瘤中的表达情况,在食管癌的具体组织学分型中,FZD6的表达差异是否具有偏向。收集64例食管癌患者的配对组织样本(样本来源于中国医学科学院肿瘤医院和北京301医院),对组织样本进行TRLzol研磨提取总RNA,进行RT-q PCR实验,对癌与癌旁组织中FZD6表达情况进行分析。采用食管鳞癌及正常细胞系,用TRLzol裂解液提取总RNA,进行RT-q PCR实验分析细胞系中FZD6的表达差异。采用免疫组织化学染色实验对食管癌组织芯片进行染色,分析FZD6的表达情况。采用RNAi方法对细胞系进行敲降实验。采用质粒转染对细胞系进行过表达实验。采用RTq PCR实验及Western bloting对敲降及过表达效率进行验证。用CCK-8实验方法来检测过表达FZD6对细胞增殖能力的影响。采用Transwell实验检测FZD6的过表达及敲降对食管鳞癌细胞的侵袭和迁移能力的影响。采用平板克隆实验检测FZD6的敲降对食管鳞癌克隆能力的影响。利用RNAi方法对食管鳞癌细胞系中转录因子TP63、SOX2进行敲降,用RT-q PCR实验检测转录因子的敲降效率以及敲降后FZD6的变化。使用质粒转染对细胞系中TP63、SOX2进行过表达实验,用RTq PCR实验检测转录因子过表达效率以及过表达后FZD6的变化。结果1数据库分析显示FZD6在食管癌中表达量明显高于正常组织,并且食管鳞癌中FZD6的表达量显著高于食管腺癌及正常组织,而食管腺癌中FZD6的表达量与正常组织中的表达量差异不明显。2免疫组化分析显示FZD6在癌组织中的表达量明显高于癌旁组织。3 RT-q PCR实验中,食管鳞癌细胞系中FZD6表达量明显高于正常食管上皮。4 RNAi方法干扰后,FZD6的表达量明显低于对照组,质粒转染后FZD6的表达量明显高于对照组。5 CCK8实验中,FZD6敲降组细胞的增殖明显低于对照组。6 Transwell实验中,FZD6敲降组细胞的侵袭及迁移能力明显低于对照组,FZD6过表达组细胞的侵袭及迁移能力明显高于对照组。7平板克隆实验中,FZD6敲降组细胞的克隆形成能力明显低于对照组。8 RNAi方法对细胞系进行干扰后,TP63及SOX2的表达量明显低于对照组,质粒转染后TP63及SOX2的表达量明显高于对照组。9 TP63及SOX2敲降后,FZD6的表达量低于对照组,TP63及SOX2过表达后,FZD6的表达量高于对照组。结论1 FZD6在食管鳞癌中特异性高表达。2 FZD6能够促进食管鳞癌的侵袭、迁移、增殖及克隆能力。3 FZD6的表达受转录因子TP63、SOX2的调控。图 15 幅;表 1 个;参 149 篇
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