本课题在已有的禽流感DNA疫苗pCAGGoptiH5的基础上,以中试和新药申报为目的,对该疫苗的体内分布和制备工艺进行了较为系统的研究。选择21日龄SPF鸡以10ug/只的剂量,肌肉注射禽流感DNA疫苗pCAGGoptiH5,在接种后的1h、3h、1d、3d、7d、15d、30d、50d、80d、120d、150d、200d、280d对SPF鸡血、心、肝、脾、肺、肾、胃、肠、脑及注射部肌肉进行PCR检测。结果核酸疫苗在免疫后1小时,就已分布到各目的组织中,在血中可存留15天,而在注射部肌肉中可存留达280天。此外,已有的试验证明了禽流感DNA疫苗pCAGGoptiH5对SPF鸡可提供完全保护。而为了满足中试的需求,本试验又对DNA疫苗的制备工艺进行了研究。确立了以流加补料和变温法对宿主菌进行发酵罐发酵、碱裂解法裂解细胞、中空纤维切向流微滤+超滤法进行过滤浓缩、阴离子交换色谱进行纯化的质粒纯化工艺,在没有标准可参照的情况下,本试验对纯化所得禽流感DNA疫苗pCAGGoptiH5从四个方面进行了鉴定:纯度、酶切鉴定、PCR鉴定、免疫活性鉴定,结果显示本工艺纯化所得质粒稳定且免疫活性高。