本论文对１株H5N1亚型的禽流感病毒中国大陆分离株进行了分子遗传衍化、生物学特性的研究并以该病毒为基础建立了反向遗传操作系统。首先,对此株病毒进行全基因组序列的测定、并与1996—2004年的东亚不同地区H5N1亚型HPAI代表株基因组的8个基因序列比较进行了分子遗传衍化的分析，结果表明此毒株各基因(除NA基因外)的核苷酸序列的同源性及分子进化关系与中国广东1996、1997年分离到的GGD/1/96、GGD/3/97两个H5N1亚型禽流感毒株亲缘关系较近，而与香港1997年禽流感事件的H5N1亚型代表株CHK/220/97﹑HK/483/97﹑HK/486/97的亲缘关系相对较远。因此，可以推测本实验毒株DSH/8/01很可能是由中国华南地区的早期的H5N1亚型禽流感毒株变异衍化而来，为一株GGD/1/96-like的H5N1亚型禽流感的病毒。其次，通过此毒株对鸡的致病性试验发现：其EID50为10-8.33/0.1ml，感染鸡的IVPI为3.00、鸡的鼻腔感染平均死亡时间为3.82天、鸡的静脉接种的平均死亡时间为1.00天，故此毒株为高致病力禽流感病毒毒株。此株病毒经鼻腔接种感染后，病毒在鸡的不同组织器官中的病毒含量有所不同，在肺组织中的病毒含量最高高达6.98㏒10EID50/0.1ml，其它依次为心肌、法氏囊、肾脏、脑组织、脾脏、肝脏，而仅有个别鸡可从小肠分离到病毒，胰腺中分离不到病毒。由此可见，此株高致病力禽流感病毒对鸡具有广泛的组织嗜性。第三,通过此毒株对小鼠的致病性试验发现：此毒株不仅对鸡具有高致病力，而且其可感染小鼠，并表现一定的致病性。此毒株在大剂量攻毒（50微升106、105EID50）时，小鼠表现出明显的临床症状(皮毛卷曲,弓背团缩,嗜睡等)、体重显著下降，甚至引起小鼠死亡，故对小鼠有较高的致病性。小剂量50微升104～101EID50攻毒时，小鼠体重变化基本上不明显。另外，此毒株MLD50为104.16EID50，故其对小白鼠表现为中等致病力。从此毒株感染小鼠的组织嗜性试验结果来看，经鼻腔接种感染小鼠后，禽流感病毒在肺脏中一直保持较高的含量；在脑中病毒的含量次之，并随时间的增加有所增高；在肾脏﹑脾脏﹑肝脏、心脏、血液可分离到病毒但含量并不高；小肠、胰腺几乎分离不到病毒。因此。此株H5N1亚型禽流感病毒经鼻腔感染小鼠后，病毒可通过呼吸系统侵入其他大部分组织器官，并可突破血脑屏障侵入大脑组织，最终引起小鼠死亡。这些结果表明对禽类有高致病力的H5N1亚型禽流感病毒，经哺乳动物体内复制增殖后，对哺乳动物的致病性有明显的差异。同时，也证明H5N1禽流感病毒可以直接对哺乳动物发病，甚至死亡。因此，可推测本实验毒株DSH/8/01具有潜在的感染人的可能性。 <WP=3>最后,应用8质粒反向遗传操作系统救获出了具有感染性的重组病毒粒子，为进一步对此毒株进行反向遗传操作奠定了实验基础。总之,本研究对此株H5N1亚型高致病力禽流感病毒的生物学特性(包括分子生物学特性)进行了系统,并建立了此毒株的反向遗传操作系统,为今后进一步研究我国H5N1亚型禽流感病毒的致病机制、病毒的结构与功能、筛选新型疫苗毒株奠定实验和理论基础，同时也为我国H5N1亚型高致病力禽流感的遗传与衍化的研究提供了实验数据。