人血清中尿素、尿酸与肌酐含量的测定是临床检测中关键的生化指标,为临床诊断和观察病情提供了依据。目前已有多种方法应用于临床实验室中尿素、尿酸与肌酐的含量测定,为保证测量结果的准确可比,实现测量的标准化迫切需要建立准确、可靠的参考方法,研制相关标准物质满足来临床检验的需求。本文以13C,15N2-尿素作为内标,乙腈为蛋白沉淀剂,用带有电喷雾离子源的三重四极质谱的多重反应监模式(MRM)检测目标离子对(m/z61.1-44,64.1-46),使用括号法定量,分别考查了血清尿素准确测量的所需的前处理条件、液相色谱分离条件、质谱条件和测量条件建立了测定血清中尿素的液相色谱-同位素稀释串联质谱方法。应用本法对两种浓度的血清尿素进行定值,结果的相对标准偏差(RSD)均小于1%,使用美国NIST标准物质909b LevelⅠ对方法进行验证,测量结果与靶值的偏差为-0.38%且在给定的不确定度范围内。方法的检测限为0.55μg/g(3倍信噪比),方法的平均回收率为100.1%和99.9%,通过参加RELA2009血清尿素量值比对,进一步对方法进行确证。对盲样进行了准确测定,全面分析了影响测量结果的因素,并对不确定度进行了评定,对于两个水平的血清尿素不确定度分别为1.2%和0.84%。本文提出的血清中尿素测量的液相色谱-同位素稀释串联质谱法,原理可靠、前处理简单、定量准确,可作为血清尿素测量的候选参考方法。中国计量科学研究院化学计量与分析科学研究所组织了中、日、韩三国计量院的血清中代谢物(尿酸、肌酐)量值比对,应用液相色谱-同位素稀释串联质谱法对目标物进行测定,各国的测量结果等效一致。