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本研究利用传统微生物学方法，从郑州奶牛场土样中筛选到一株碱性蛋白酶产生菌菌株A-109，通过形态观察及生理生化反应，我们初步鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌。以菌株A-109的总DNA为模板，用降落PCR(TouchdownPCR，TD-PCR)的方法对总DNA样品进行了蛋白酶编码序列的扩增，获得目的片段。对该扩增片段进行测序，测序结果及同源性分析显示:该片断含1200个碱基对，包含的阅读框含1096碱基对，该片断为蛋白酶DNA片段，能在数据库找到同源蛋白酶基因序列。克隆到的蛋白酶DNA片段与碱性蛋白酶E(GenBankNo:AJ539133)的编码区同源性高达99％，与中性蛋白酶(GenBankNo:NC003997)的编码区序列最多有94％的相似性，至少有20个氨基酸的差异。将它克隆到大肠杆菌表达载体PET中，获得的重组质粒在大肠杆菌BL21中进行表达。结果表明:在30℃培养温度下，经诱导物IPTG(0.3mmol/L)诱导4h后表达产生的蛋白酶量较大，表达的产物不能直接分泌到培养基中，菌落经裂解液裂解后表达产物可以在牛奶平板上产生水解圈，但是表达产生的蛋白酶活力远远小于野生菌产生的蛋白酶活力；根据成熟蛋白酶在牛奶平板上能形成水解圈，可以初步判断该酶具有蛋白水解活性，进一步的酶学性质检测表明该蛋白酶的最适温度为50℃，最适PH为8.5。