论文部分内容阅读
研究背景和目的:癌高甲基化基因(HIC1)是一个肿瘤抑制基因,在人类多种肿瘤组织中,HIC1经常出现表达缺失或启动子区域高甲基化表观遗传修饰而表达沉默的现象,这通常预示着肿瘤的不良预后。然而,HIC1在胰腺癌发生发展中的作用没有阐明,特别在调控胰腺癌侵袭转移能力的分子机制方面没有报道。在本研究中,我们主要探索HIC1表达水平对胰腺癌侵袭转移能力的影响以及分子机制研究,并最终为胰腺癌寻求有效的治疗靶点奠定基础。实验方法与材料:我们收集了手术后切除的胰腺癌组织和几种常见的胰腺癌细胞系,运用免疫印迹和定量PCR的方法检测了HIC1的m RNA和蛋白表达水平。然后,我们通过对胰腺癌组织芯片免疫组化染色的方法,评估HIC1的表达与胰腺癌病理特征的关联,并全面统计分析了临床病例资料,分析患者的生存与预后。进一步,我们通过过表达和RNAi干扰技术,在体内体外水平,探讨HIC1的表达水平对胰腺癌细胞侵袭转移能力的影响。最后,我们运用免疫共沉淀和激光共聚焦的技术,确定了HIC1与STAT3的相互作用,并通过双荧光素酶报告基因技术和Ch IP-PCR技术,检测HIC1对IL-6/STAT3信号通路的作用。实验结果:HIC1在胰腺癌组织和胰腺癌细胞系SW1990、ASPC-1、PANC-1、BXPC-3、MIAPACA-2中明显表达下调或者沉默丢失。组织芯片显示HIC1在肿瘤组织和癌旁组织中表达具有显著性差异。HIC1的表达丢失与肿瘤的恶性程度和患者的不良预后明显相关。体内体外实验证实,恢复HIC1的表达能显著抑制胰腺癌的侵袭转移能力,下调HIC1的表达能促进胰腺癌的侵袭转移。HIC1与STAT3相互结合形成复合物,抑制STAT3转录活性,从而抑制IL-6/STAT3信号通路下游靶基因c-Myc,VEGF,Cyclin D1,MMP2,MMP9的表达。结论:HIC1是IL-6/STAT3信号通路的负性调节因子。HIC1抑制胰腺癌侵袭转移主要与其抑制STAT3信号通路侵袭转移相关关键基因(c-Myc、Cyclin D1、VEGF、MMP2、MMP9)的表达有关。HIC1的表达丢失是胰腺癌发生发展的一个重要因素。