目的:凝血因子Ⅷ(FⅧ)、凝血因子Ⅸ(FⅨ)和D-二聚体检测是临床常用的血栓与止血检验项目，目前国内部分实验室FⅧ、FⅨ和D-二聚体检测结果的准确性和可比性较差，需要研制参考物质以帮助其实施质量改进。为此，卫生部临床检验中心研制了4个批号的FⅧ和FⅨ活性检测参考物质和5个批号的D-二聚体定量检测参考物质，本课题对参考物质进行了评价和定值研究，同时对FⅧ、FⅨ和D-二聚体检测的一致化相关问题进行了探讨，以期为临床实验室实施质量改进提供帮助。　　方法:1.FⅧ和FⅨ活性检测参考物质的评价和定值:依据ISO Guide35《标准样品定值的一般原则和统计方法》，CNAS-GL03《能力验证样品均匀性和稳定性评价指南》和CLSI EP-30《参考物质定值和互通性评价指南》的要求，对参考物质的均匀性、稳定性和互通性进行评价。依据JJG1006-94《一级标准物质技术规范》和ISO Guide35《标准样品定值的一般原则和统计方法》的要求，采用多家实验室联合定值的方式，以NIBSC凝血标准品(LOT4)为溯源标准，由8家实验室使用3种检测系统(Sysmex、Stago和IL)对参考物质进行定值。　　2.FⅧ和FⅨ活性检测结果一致化相关问题研究:①检测系统性能验证:参照文献及指南文件，结合厂家建议及专家意见制订性能验证方案，对STA-R Evolution血凝仪FⅧ和FⅨ活性检测的性能（包括批内精密度、日间精密度、正确度和线性）进行验证。②参考物质室内质控试应用:将参考物质应用于室内质控，计算检测结果的均值、标准差和累积变异系数(CV)，并与进口配套质控物的检测结果进行比较，评价其室内质控应用效果。③不同系统检测结果可比性及校准模式研究:依据EP9-A2，对Stago和Sysmex系统FⅧ和FⅨ活性检测结果的可比性进行评价;分别以LOT4定标，高值参考物质定标和4个批号参考物质联合定标的方式对Stago和Sysmex系统进行校准，比较不同校准条件下系统间检测结果的可比性变化，探讨最佳校准模式。　　3.D-二聚体检测参考物质的评价和定值:依据ISO Guide35《标准样品定值的一般原则和统计方法》，CNAS-GL03《能力验证样品均匀性和稳定性评价指南》和CLSIEP-30《参考物质定值和互通性评价指南》的要求，对临检中心研制的参考物质的均匀性、稳定性和互通性进行评价。依据JJG1006-94《一级标准物质技术规范》和ISOGuide35《标准样品定值的一般原则和统计方法》的要求，采用8家实验室联合定值的方式，使用3种以FEU为报告单位的检测系统（Sysmex、Stago和Vidas）对参考物质进行定值。　　4.D-二聚体检测结果一致化相关问题研究:①检测系统性能验证:参照相关指南文件，结合厂家建议及专家意见制订性能验证方案，对Stago STA-R Evolution全自动血凝仪D-二聚体检测的批内精密度、日间精密度和检测线性进行验证。②参考物质室内质控试应用:将参考物质应用于室内质控，计算检测结果的均值、标准差和累积变异系数(CV)，并与进口配套质控物进行比较，评价其室内质控应用效果。　　结果:1.FⅧ和FⅨ活性检测参考物质的评价和定值:各批号FⅧ和FⅨ参考物质均匀性评价单因素方差分析结果均P＞0.05，表明参考物质均匀性良好;FⅧ和FⅨ活性检测的瓶间均匀性不确定度(ubb)分别为0.5％～2.9％和0.1％～3.9％。将参考物质置于-80℃条件下保存，在评价期限内（9个月）FⅧ和FⅨ活性检测结果无趋势性变化，表明参考物质稳定性良好;其长期稳定性不确定度(ults)分别为0.5％～5.1％和0.8％～4.4％。各批号参考物质在Sysmex、Stago和IL三种检测系统间均具有互通性。定值检测结果经离群值检验、等精度检验和正态性检验后，4个批号FⅧ和FⅨ活性检测参考物质分别以8、8、8、6家和8、7、8、7家实验室的检测结果均值为定值结果，定值过程不确定度(uchar)分别为0.7％～2.4％和0.4％～2.4％。合成并扩展不确定度后（扩展因子k=2），4个批号参考物质FⅧ活性定值结果分别为（85±13）％、(36±4)％、（20±3）％和(6±2)％，FⅨ活性定值结果分别为(102±13)％、(48±7)％、(29±4)％和(10±2)％。　　2.FⅧ和FⅨ活性检测结果一致化相关问题研究:①性能验证结果显示FⅧ和FⅨ活性检测批内及日间精密度均在厂家要求范围内;正确度验证结果显示FⅧ和FⅨ结果与靶值间的偏倚分别为-5.0％和12.7％;线性回归方程相关系数R2均＞0.99，FⅧ活性检测在10.3％～149.6％范围内的线性验证通过，FⅨ活性检测在16.7％～200.2％范围内的线性验证通过。②将参考物质用于室内质控，FⅧ和FⅨ活性检测结果CV分别为3.1％～4.5％和4.3％～5.6％，均相近于商品质控物CV(6.4％～6.9％和5.0％～7.8％）。③对于Stago STA-R Evolution和Sysmex CS5100两系统，比对FⅧ活性检测结果范围为1.3％～123.1％的40份临床标本，结果显示其相关性R2=0.95，以相对偏差±30％（当浓度水平＞12％时）或绝对偏差±3％（当浓度水平≤12％时）为可接受标准，85％偏差结果在可接受范围内。系统间的绝对偏差范围和相对偏差分别为-3.8％～0（均值≤12％时）和-18.0％～46.8％（均值＞12％时）。比对FⅨ活性检测结果范围为3.4％～147.6％的37份临床标本，结果显示其相关性R2=0.95，84％标本偏差在可接受范围内。系统间的绝对偏差范围和相对偏差范围为1.5％～2.6％（均值≤12％时）和当-17.6％～40.4％（均值＞12％时）。分别用LOT4、高值参考物质校准和4个批号参考物质联合校准后，FⅧ临床标本相关性方程R2值均为0.94;相应的FⅨ临床标本相关性方程R2值均为0.96。LOT4、高值参考物质校准和4个批号参考物质联合校准后，FⅧ可比性允许结果数分别为95％、88％和90％，当均值≤12％时，三种校准模式下FⅧ系统间绝对偏差范围分别为-3.8％～0、-5.4％～0.8％和-5.1％～1.4％，当均值＞12％时，相对偏差范围分别为-29.9％～30.4％、-42.1％～21.0％和-33.3％～21.9％。FⅨ可比性允许结果数分别为92％、95％和95％，当均值≤12％时，系统间的绝对偏差分别为0.1％～3.1％、-0.6％～2.3％和-0.7％～2.4％，当均值＞12％时，相对偏差范围分别为-21.6％～36.0％、-33.1％～26.7％和-31.3％～28.5％。　　3.D-二聚体检测参考物质的评价和定值:D-二聚体各批号参考物质均匀性评价单因素方差分析结果均P＞0.05，表明参考物质均匀性良好;其瓶间均匀性不确定度(ubb)范围为0.001％～0.033％。将参考物质置于-80℃保存条件下，在评价期限内（11个月）D-二聚体检测结果无趋势性变化，表明参考物质稳定性良好;其长期稳定性不确定度(ults)分别为0.011％～0.104％。各批号参考物质在Sysmex、Stago和Vidas三种检测系统间均具有互通性。定值检测结果经离群值检验、等精度检验和正态性检验后，5个批号D-二聚体定量检测参考物质分别以6、6、7、8和7家实验室的检测结果均值为定值结果，定值过程不确定度(uchar)分别为0.011％～0.096％。合成并扩展不确定度后（扩展因子k=2），5个批号参考物质定值结果分别为:(0.27±0.04) mg/L、(0.35±0.04) mg/L、(0.58±0.06) mg/L、(2.01±0.19) mg/L和(2.79±0.30) mg/L。　　结论:1.FⅧ和FⅨ活性检测参考物质的均匀性和稳定性良好，在3种主流检测系统间具有互通性，定值结果准确可靠。　　2.①STA-R Evolution血凝仪FⅧ和FⅨ活性检测性能符合厂家及相关文件的要求，性能验证方案可为其它检测系统的性能验证提供参考。②参考物质可应用于FⅧ和FⅨ活性检测日常室内质量控制。③对于Stago STA-R Evolution和Sysmex CS5100两系统，分别比对FⅧ活性检测结果范围为1.3％～123.1％的40份临床标本和FⅨ活性检测结果范围为3.4％～147.6％的37份临床标本，FⅧ和FⅨ活性检测结果相关性好(R2≥095)，可比性可接受（至少80％结果在允许范围内）。使用LOT4、高值参考物质单独校准和4个批号参考物质联合校准后，FⅧ和FⅨ活性检测相关性无明显变化，可比性均提高。　　3.D-二聚体检测参考物质，其均匀性和稳定性良好，在3种主流检测系统间具有互通性，定值结果准确可靠。　　4.①STA-R Evolution血凝仪的D-二聚体定量检测性能验证结果符合厂家及国家指南要求，性能验证方案可为其它检测系统的性能验证提供参考。②参考物质可用于D-二聚体检测日常室内质量控制。③基于本次研究结果显示，对于Stago STA-REvoltuion和Sysmex CA1500两系统，比对D-二聚体检测结果范围为0.18mg/L～3.69mg/L的38份临床标本，其结果相关性好(R2≥095)，可比性可接受（至少80％结果在允许范围内），用高值单独校准和5个批号参考物质联合校准后，两系统间相关性和可比性无明显改善。